Instrucţiuni pentru testarea migrării aminelor aromatice primare de pe articolele de bucătărie din poliamide

2 PROTOCOL B PRIN LC-MS

Această procedură descrie o metodă pentru determinarea cantitativă a aminelor aromatice primare (PAA) în simulant alimentar în soluţie de 3% acid acetic, prin cromatografia lichidului combinată cu spectrometria de masă (LC-MS/MS). Obiectivul îl reprezintă determinarea PAA în teste specifice de migrare asupra materialelor ce vin în contact cu alimentele. Acest protocol a fost avizat printr-o singură validare de laborator NRL-ES (referinţă Sendon et al, 2010). Metoda a fost validată pentru 8 PAA, care sunt prezentate în tabelul de mai jos împreună cu domeniul de concentraţii în μg/kg simulant.

Amine	CAS	Domeniul de μg/kg simulant
m-Fenilendiamină (m-PDA)	108-45-2	≥2,5
2,6-Toluendiamină (2,6-TDA)	823-40-5	≥2,5
2,4- Toluendiamină (2,4-TDA)	95-80-7	≥2,5
1,5- Diaminenaftalen (1,5-DAN)	2243-62-1	≥2,5
Anilină (ANL)	62-53-3	≥2,5
4,4'-Diaminodifenileter (4,4'-DPE)	101-80-4	≥2,5
4,4'-Metilendianilină (4,4 -MDA)	101-77-9	≥2,5
3,3'- Dimetilbenzidină (3,3-DMB)	119-93-7	≥2,5

2.1 Principiu

Simulantul alimentar acid obţinut în testul de migrare este supus neutralizării cu amoniac înainte de analiza cromatografică. PAA individuale sunt separate într-o coloană C18 de reversie în mod mixt iar detectarea masei se realizează cu ajutorul ionizării pozitive electrospray (ESI+), în modul monitorizare multireacţie (MRM).

2.2 Materiale şi substanţe chimice

2.2.1 Analiţi şi substanţe chimice

Toţi reactivii trebuie să fie în stare pură, în absenţa prevederilor contrare.

1. 
   Acetic acid pur
   
2. 
   Metanol, calitate LC MS
   
3. 
   Apă purificată
   
4. 
   Acetat de amoniu, 99%
   
5. 
   Hidroxid de amoniu, 25%
   
6. 
   m-fenilendiamină (m-PDA), CAS 00108-45-2,
   
7. 
   2,6-toluendiamină (2,6-TDA), CAS 00823-40-5
   
8. 
   2,4-toluendiamină (2,4-TDA), CAS 00095-80-7
   
9. 
   Anilină (ANL), CAS 00062-53-3
   
10. 
    1,5-diaminonaftalenă (1,5-DAN), CAS 02243-62-1
    
11. 
    4,4'-diaminodifenileter(4.4'-DPE), CAS 00101-80-4
    
12. 
    4,4'-metilendianilină (4,4"-MDA), CAS 00101-77-9
    
13. 
    3,3'-dimetilbenzidină (3,3-DMB), CAS 00119-93-7
    

2.2.2 Soluţii

100 mM acetat amoniu: masă 7,72 g, se dizolvă în apă, se ajustează volumul la 1L

10 mM acetat amoniu 10 mM: se diluează 50 ml de acetat amoniu 100mM în 500 ml cu apă

2.2.2.1 Soluţii individuale de stoc PAA:
Se cântăresc cu rotunjire la 0,1 mg aproximativ 25 mg din fiecare amină în fiole gradate individuale de 50 ml, se diluează cu metanol şi se completează volumul. Se calculează concentraţia exactă în μg/ml pentru fiecare analit.
NOTĂ: Soluţiile de stoc pot fi depozitate într-un frigider (4-8 °C) ferit de lumină până la 6 luni.
2.2.2.2 Soluţii mixte de stoc PAA (5 μg/ml)
Se transferă într-o fiolă gradată de 10 ml câte 100 μg din fiecare soluţie, se diluează şi se completează volumul cu metanol. Se calculează concentraţia exactă în μg/ml pentru fiecare analit.
NOTĂ: Această soluţie mixtă poate fi depozitată într-un frigider (4-8 °C) şi ferită de lumină până la 6 luni.
2.2.2.3 Soluţie mixtă diluată PAA (100 ηq/ml)
Se transferă într-o fiolă gradată de 25 ml 500 μg din soluţia mixtă de stoc, se diluează şi se completează volumul cu 3% acid acetic. Se calculează concentraţia exactă în μg/ml pentru fiecare analit.
NOTĂ: Această soluţie mixtă poate fi depozitată într-un frigider (4-8 °C) şi ferită de lumină până la 2 săptămâni.
2.2.2.4 Soluţii de calibrare PAA (2-20 μq/ml)
Se adaugă 4 ml de simulant (3% acid acetic) supus aceloraşi condiţii de migrare de timp şi temperatură ca eşantioanele într-o serie de fiole gradate de 5 ml. Se transferă în fiole, cu ajutorul micro-siringilor următoarele volume de soluţie mixtă diluată şi se completează volumul cu 3% acid acetic. Se neutralizează soluţia adăugând 250 μl de hidroxid de amoniu şi amestec. Se calculează concentraţia exactă în μg/ml pentru fiecare analit.
NOTĂ: Se verifică că pH-ul soluţiei neutralizate este bazic

Volumul de PAA 100 μg/ml	Concentraţia μg/ml	Concentraţia echivalentă în eşantion ** μg/kg simulant
0 μl	0	0
100 μl	2	2,5
250 μl	5	6,25
500 μl	10	12,5
750 μl	15	18,75
1000 μl	20	25

** A fost luat în calcul factorul de diluare folosit în prepararea eşantionului
NOTĂ: Aceste soluţii de calibrare trebuie preparate zilnic.

2.2.3 Aparatură

Balanţa analitică, micro-siringi: 100, 250, 500, 1000 μl., PTFE 0,2 μm filtru eşantion

Echipamente LC/MS-MS:

• 
  Cromatograf lichide de mare performanţă, cu încălzitor de coloană
  
• 
  Spectrometru cvadripolar triplu de masă cu sursă de ionizare electrospray
  
• 
  Coloană: XTerra RP18, (150mm*4,6 mm* 5 μm) sau echivalent
  
• 
  software procesare cromatografie / date
  

3.