Instrucţiuni pentru testarea migrării aminelor aromatice primare de pe articolele de bucătărie din poliamide

1.2.3 Aparatură

1. 
   Cromatograf pentru lichid de înaltă performanţă, HPLC cu încălzitor de coloană
   
2. 
   Spectrometru de masă triplu cvadripolar cu interfaţă electrospray.
   
3. 
   Balanţă
   
4. 
   Baie ultrasonică
   
5. 
   Software cuantificare LC-MS/MS
   
6. 
   Coloană HPLC
   

S-a dovedit că următoarea coloană este potrivită: Filtru pre-coloană: 0.5 μm inox, coloană: Zorbax SB-C3, (2.1mm* 150 mm, 5 μm)

1.3 Proceduri

1.3.1 Analiză

Determinarea specifică a PAA este efectuată pe soluţie apoasă de apă distilată sau 3 % acid acetic din testele de migrare.

1.3.2 Condiţii HPLC

Volum injecţie: 3 μl temperatură coloană: 40 °C
Faza mobilă A: preparare 4.7 mM PFPA în metanol.
Faza mobilă B: preparare 4.7 mM PFPA în apă distilată. (5.3.2.3)

Gradient:

Timp	% A	% B	Debit (ml/min)
0	5	95	0.2
3	20	80	0.2
7.5	80	20	0.5
8.0	80	20	0.5
11.0	5	95	0.5
14.0	5	95	0.2

Condiţii spectrometru de masă
Mod ion:	ESI+	Tensiune capilară (kV):	1,0
Con (V):	20	Hex 1 (V):	20
Apertură (V):	0,2	Hex 2 (V):	0,2
Temperatura sursă (°C):	130	Temperatură dizolvare (°C)	400
Debit gaz con (l/h)	40	Debit gaz dizolvare (l/h):	775
Rezoluţie LM 1 şi LM 2:	13	Rezoluţie HM 1 şi LM 2:	13
Energie ionică 1 şi 2:	1,0	Multiplicator (V):	650

Tabelul 2: parametrii MS/MS pentru PAA specifici:

PAA	MW	MRM	Timp de retenţie* (min)	Fereastră de retenţie (min)	Energia de coliziune (eV)	Timp de staţionare
m-PDA	108,1	109,1 > 92,2	3,0	1,5-4,8	22	0,5
2,6-TDA	122,1	123,1 > 108,3	3,3	1,5-4,8	18	0,5
2,4-TDA	122,1	123,1 > 108,3	3,5	1,5-4,8	18	0,5
ANL	93,1	94,0 > 77,2	4,0	1,5-4,8	18	0,5
4,4-DPE	200,2	201,1 > 108,3	5,4	4,8-6,3	18	0,2
4,4'-MDA	198,3	199,1 > 106,2	5,6	4,8-6,3	22	0,2
3,3'DMB	212,3	212,1 > 196,0	8,0	6,2-7,0	25	0,2

*) timp de retenţie observat la o coloană dată

1.3.3 Calibrarea HPLC

În toate seriile analitice, se determină răspunsul calitativ al unui eşantion de control a două PAA. Eşantionul de control este injectat de 4 ori pentru a se obţine un răspuns stabil.
Notă: Răspunsul la cea de-a patra injecţie a unui eşantion de control trebuie să fie constant pe parcursul seriei analitice. Acest lucru se verifică cu ajutorul unui card de control.
Apoi sunt injectate soluţiile de calibrare la 4 concentraţii pentru a se obţine curba de calibrare. Răspunsul la fiecare standard de calibrare este determinat de două ori repetând analiza standardelor de calibrare la fiecare 10-15.
O serie de 10 -15 eşantioane necunoscute sunt injectate suplimentar într-un eşantion de referinţă. În toate cazurile eşantioanele sunt determinare prin dublă injectare.

1.3.4 Cuantificarea nivelelor de analit

Calculul nivelelor de analit din eşantioane se realizează prin utilizarea curbelor externe standard generate din analiza soluţiilor standard la 4 nivele diferite. Pentru fiecare PAA, fiecare standard de calibrare este determin de două ori iar răspunsul la cele două standarde de calibrare este utilizat pentru trasarea curbelor de calibrare. Regresia liniară a datelor de calibrare se realizează utilizând metoda ponderată a celor mai mici pătrate (pondere 1/x).
NOTĂ: Curbele de calibrare trebuie să fie liniare iar coeficientul de corelare trebuie să fie de cel puţin 0,99. În plus liniaritatea fiecărui PAA poate fi evaluată prin examinarea graficului valorilor reziduale.
Eşantioanele cu concentraţie PAA peste 50 0181 μg/l sunt diluate cu apă distilată sau 3 % acid acetic la un nivel de < 50 μg/l şi apoi reanalizate.

1.3.5 Confirmarea identităţii

Dacă se detectează un PAA, identitatea PAA este verificată prin detecţia unui ion suplimentar derivat (a se vedea tabelul 3). Verificarea se execută prin compararea raportului dintre semnalul ionului derivat şi cele detectate în standardele de calibrare.
Tabelul 3: ioni derivaţi suplimentari pentru verificarea identităţii analiţilor

PAA	Timp de reţinere (min)*	Ion-mamă> Ion derivat
m-PDA	3,0	109,1 > 65,4
2,6-TDA	3,3	123,1 > 106,2
2,4-TDA	3,5	123,1 > 106,2
ANL	4,0	94,0 > 51,3
4,4'-DPE	5,4	201,1 > 184,0
4,4'-MDA	5,6	199,1 > 77,2
3,3'-DMB	8,0	212,1 > 211,1

*) timp de retenţie observat la o coloană dată