Laboratoriya mashg‘uloti mavzu: Unayotgan urug’ tarkibidagi amilaza fermentini aniqlash Mashg'ulot shakli: «Sanoat farmatsiyasi» va «Biotexnologiya»

Ishni bajarish tartibi


Xomashyo: Undirilgan arpa yoki bug‘doy doni.
Reaktivlar:
1) 2% kraxmal eritmasi;
2) 1 n HCl;
3) Atsetat bufer 500ml;
4) 1% NaCl eritmasi 100ml.;
5) Kalsiyning nordon sirka tuzi;
6) 0,3 n J – KJ;
7) Distillangan suv.


Jihozlar:
1) Suv xammomi;
2) Sentrifuga;
3) SF – 26 ;
4) O‘lchov kolbalari;
5) Elektron tarozi;
6) Suv termometri;
7) Shisha probirkalar;
8) Pipetkalar.

150,0 – 200,0 ml hajmli kolbaga 1gr undirib, quritilib,maydalangan bug‘doy yoki arpa donini solib ustiga 100ml 1% NaCl eritmasi qo‘shiladi va yaxshilab aralashtirib, suv xammomiga (50^oC, 60^oC, 70^o C) qo‘yiladi. 10 daqiqadan so‘ng 3 ta probirkaga 5ml dan olib sentirifugalanadi. SHundan so‘ng probirkaga sentirifugalangan ekstraktdan 1ml olib 1:10 ya’ni (9ml distillangansuv, 1ml ekstrakt) solib chayqatiladi. Shundan 5ml olib, unga pichoq uchida kalsiyning nordon sirka tuzidan qo‘shamiz va suv xammomida 40^oS 15 daqiqaga qo‘yiladi. So‘ng tezda sovuq suvda sovutiladi. Probirkaga (1ta kontrol va 3ta ekstrakt uchun) 3ml dan atsetat bufer va 3ml 2% kraxmal eritmasiq o‘shiladi. So‘ng aralashtirib ,suv xammomida 40^oS gacha qizdiriladi. Ekstrakt uchun olingan 3ta probirkaga 1ml dan filtrat qo‘shib, suv xammomida 40^oC da 30 daqiqaga qo‘yiladi. Kontrol eritmaga 1 ml distillangan suv qo‘shiladi.4 ta probirkaga (1 kontrol va 3ta ekstrakt) 2ml dan 1n HCl qo‘shiladi. Buning natijasida fermentning faolligi to‘xtaydi. Xar bir probirkaga 1 ml dan 0,3 nJ – KJ qo‘shib, spektrofotometr – 26 da 595 nm to‘lqin uzunligida optik zichligi aniqlanadi.

1.Nazorat eritmasi 0,557

2. 0,526 3,3
3. 0,524 3,6
4. 0,526 3,3
α- amilaza faolligi (soni) quyidagi ifoda bo‘yicha aniqlanadi:





A – amilaza faolligi (soni) mg;
E_k – kontroleritmaningoptik zichligi;
E_o– eritmaning optikzichligi;
S – qo‘llanilgan kraxmal soni (3ml 2% kraxmal eritmasi uchun -6 mg) .