II BOB. Mitoxondriya ichki membranasi o'tkazuvchanligining o'zgarishini aniqlash
2.1 Mitoxondriyalar ichki membranasining turli kationlar uchun o'tkazuvchanligining o'zgarishini aniqlash Mitoxondriya membranasi passiv transport turli tuzli eritmalarda (1-jadval) ularning energiyaga bog'liq bo'lmagan shishish kinetikasi bo'yicha baholanadi. Elektrolitlar ishtirokidagi osmotik shishish muhim ahamiyatga ega. Mitoxondriya matriksiga anion va kationlaming kirishi natijasida organella ichida osmotik bosimning oshishiga sabab bo'ladi, lekin bu diffuziya potensialiga bog'liq emas. Mitoxondriya ichki membrana orqali H+- o'tkazuvchanlikni aniqlash uchun ammoniy nitratning izoosmotik eritmasidan foydalanildi. Mitoxondriya membranasi NO3- va NH3+ ionlari uchun yaxshi o'tkazuvchanlikka ega, lekin NH+ ionlari uchun o'tkazuvchan emas.
2.2 Lipidlarni perekisli oksidlanish induksiyasi va malon dialdegidining hosil bo'lishini o'rganish Fe2+ / askorbat ga bog'liq lipidlaming perekisli oksidlanishining nefermentativ faollashuvi inkubasiya muhitiga (IM tarkibi: 125 mM KCI, lOmM Tris-HCI, pH 7,5) 10-5M FeS04 ва 2∙10-4 M askorbat qo'shish orqali chaqirildi va 1 ml ajratish muhitida 8 mg oqsil borligi hisoblab topildi. Inkubasiya 37 °C haroratli suv hammomida doimiy aralashtirib turilgan holatda amalga oshirildi.LPO ni GPK (gidroperekis kumol) ning turli konsentrasiya (yuqori konsentrasiya 4∙10-3M) larini qo'shish orqali chaqirildi. 1M da oqsilning konsentrasiyasi taxminan 8 mg/ ml ni tashkil etdi. 0,2 ml 70 % li TXUK qo'shish orqali reaksiya to'xtatildi. Shundan so'ng ushbu namunani 15 minut davomida 6000g tezlikda sentrifugalandi. Keyin 2 ml qoldiqni ajratib oldik va 1 ml TBK qo'shdik. Kontrol probirkaga 2 ml suv va 1 ml TBK qo'shdik. Aralashmani 15 minut davomida qizdirdik.
Hosil bo'lgan malon dialdegidi miqdori molyar ekstinksii koeffisienti (e = 1,56 105 M-1 sm-1) dan foydalanib, quyidagi formulaga asosan (nmol МDА/ mg belka= D/1.56x30) hisoblanadi
