Predgovor

---

Oznaka: 0098098

KLONIRANJE STANICA EMBRIJA U STRUKTURE SLIČNE OTOČIĆIMA

EMBRYONIC CELL PRODUCTION OF PANCREATIC-LIKE ISLETS
Voditelj projekta: dr. sc. Mirko Hadžija

Tel. ++385 1 4561 064   e-mail: [e-mail]

Suradnici
Mirko Hadžija, doktor biol. znanosti, znanstveni savjetnik
Marina Korolija, dipl. ing. ekologije, znanstvena novakinja u suradničkom zvanju asistentice
Marijana Popović-Hadžija, doktorica biol. znanosti, znanstvena suradnica od 7.4.2005.

Program rada i rezultati na projektu:

Naša istraživanja u ovoj godini temelje se na pokušaju uspostave primarne linije embrionalnih matičnih stanica iz 3.5 dana starih embrija (blastociste) NOD (non-obese diabetic) soja miševa. Budući da je ovaj soj miševa nama posebno zanimljiv kao eksperimentalni animalni model koji spontano razvija šećernu bolest, željeli smo dobiti uvid u razloge brojnih prijašnjih neuspjeha uspostave linije embrionalnih matičnih stanica. Kultivirali smo stoga velik broj izoliranih blastocista u uvjetima potrebnima za održavanje pluripotentnosti, što podrazumijeva hranjivu podlogu od primarnih fetalnih, mitotski inaktiviranih fibroblasta, te prisutnost citokina LIF-a (leukemia inhibitory factor). Unatoč tome pokazalo se da pluripotentne stanice unutarnje stanične mase blastociste pokazuju snažnu tendenciju diferencijacije in vitro. Kao parametre gubitka pluripotentnosti pratili smo fenotip primarnih kolonija i ekspresiju Oct4 gena čiji je produkt transkripcijski faktor neophodan za sprječavanje diferencijacije. Također smo izolirali i pratili u kulturi blastociste raznih sojeva miševa (BALB/c, C57BL/6 and C3H) koji su više ili manje pogodni za uspostavu embrionalnih linija. Za razliku od NOD soja, pluripotentne stanice svih ostalih sojeva su zadržale svoj karakter uz konstantnu ekspresiju Oct4 gena. Dakle, rezultati ovog istraživanja su pokazali da zbog snažne negativne regulacije Oct4 gena u kultiviranim blastocistama NOD miševa dolazi do spontane diferencijacije koja onemogućava uspostavu linije embrionalnih matičnih stanica. Naša istraživanja su pokazala da postojeći protokoli za derivaciju takvih linija iz niza drugih sojeva stoga nisu prikladni, i zahtijevaju preinake kako bi se uspješno zadržala fina regulacija Oct4 ekspresije u NOD stanicama.

Research programme and results:

In this year our work were based on derivation of embryonic stem cell line from 3.5 days old embryos (blastocysts) of NOD (non-obese diabetic) mouse strain. There have been many unsuccessful attempts of establishing NOD embryonic stem cell line in the past. Since this strain is of great interest to us as an experimental model of Diabetes mellitus, we tried to get closer insight into proliferation of blastocyst-derived stem cells in vitro. We grew great number of blastocysts under culture conditions that are essential for maintenance of stem cell plurypotency (presence of cytokine LIF (lukemia inhibitory factor) and feeder layer of primary mouse fetal fibroblasts). Despite that, plurypotent cells of inner cell mass of blastocyst tended to differentiate in culture rapidly. As the parameters of plurypotency, we used phenotype of primary colonies and Oct4 gene expression (gene product is transcription factor essential for maintenance of plurypotency). We also isolated and observed blastocysts of several mouse strains (BALB/c, C57BL/6 and C3H) that are more or less permissive for derivation of embryonic stem cell line. In contrast to NOD strain, plurypotent cells of all other tested strains retained stem cell phenotype and constant Oct4 gene expression. Results of our study indicated that strong downregulation of Oct4 gene in cultivated blastocysts of NOD mice induces spontaneous differentiation, and prevents establishment of embryonic stem cell line. Therefore the existing protocols for stem cell line derivation appear unsuitable in case of NOD strain, and require some adjustments in order to enable fine regulation of Oct4 expression.

---

Oznaka: 0098099

ANTITUMORSKI UČINCI VIRUSA I ONKOLITIČKA VIRUSNA CJEPIVA

VIRUS ANTITUMOROUS ACTION AND ONCOLYTIC VIRUS VACCINE
Voditelj projekta: dr. sc. Mislav Jurin

Tel. ++385 1 4680 118   e-mail: [e-mail]

Vanjski suradnici
Mislav Jurin, doktor med. znanosti, znanstveni savjetnik u mirovini
Michael Parnham, doktor med. znanosti, PLIVA - Istraživački institut, Zagreb (konzultant)
Stanislav Čajavec, doktor biotehničkih znanosti, Veterina d.o.o. Zagreb

Program rada i rezultati na projektu:

Na modelu mišjeg karcinoma in vivo je pokazano da mangan značajno poveća protutumorski učinak virusa newcastelske bolesti (VNB) soja LaSote ali ne i soja B1. Ustanovljeno je također manje povećanje protutumorskog učinka obaju sojeva VNB nakon primjene obaju sojeva s indometacinom, dok je kombinirana primjena virusa i deksametazona dovela čak i do smanjenja protutumorske aktivnosti soja LaSote. Izlaganje in vitro stanica  karcinoma SCC VII i fibrosarkoma FsaR VNB soja LaSote i E vitamina dovelo je do potpune odgode rasta fibrosarkoma te značajnog usporenja rasta karcinoma do dvadesetog dana nakon ubrizgavanja tumorskih stanica u miševe. Dobiveni rezultati potvrdili su mogućnost korištenja lentogenih sojeva VNB bilo kao zasebnih bioloških protutumorskih sredstava ili kao jedne od komponenti u kombiniranom pristupu rješavanja tumorske bolesti, uz pretpostavku nastavka istraživanja kojima će se optimizirati doze i terapijski protokoli koji će rezultirati najučinkovitijim protutumorskim odgovorom.

Research programme and results:

In vivo carcinoma treatment with a simultaneous application of manganese salt and each of the Newcastle disease virus (NDV) strains LaSota or B1 resulted in an increase of antitumor activity only in the case of the combined administration of  LaSota strain. Indometacine can also slightly augment the antitumoral activity of both NDV strains used, while carcinoma treatment with a combined application of dexamethasone and NDV  caused a decrease of LaSota  antitumoral activity. Pretreatment of SCC VII carcinoma and FsaR fibrosarcoma cells with vitamin E and NDV LaSota strain produced significant inhibition of carcinoma growth, and even an entirely postpone of fibrosarcoma growth until the day 21 after the inoculation of pretreated cells. Obtained results confirmed that lentogenic NDV LaSota and B1 strains applied alone or as one of components in combined tumor treatment could be good biological antitumoral compounds supposing that additional investigations should be conducted, which will optimize doses and therapeutical protocol resulting in the most effective antitumoral response.