Projeto de Pesquisa

Fracionamento e purificação da fração clorofórmica

Cromatografia em coluna seca

A pré-purificação da fração clorofórmica será realizada utilizando-se a cromatografia em coluna seca, por meio de uma coluna de celulose de 20 cm de comprimento e três centímetros de diâmetro interno. A celulose será escolhida por ser flexível, resistente, inerte aos solventes utilizados e transparente à luz natural e ultravioleta. Primeiramente, a coluna será tratada com hexano, para remoção da camada oleosa de proteção. Em seguida, a extremidade inferior será fechada e empacotada, deixando-se o adsorvente cair de uma altura de 20 cm. Logo após será realizada uma pressão com os dedos para aumentar o empacotamento. A amostra será preparada pesando-se 1,0 g da fração clorofórmica concentrada, e após ser redissolvida em 5 mL de clorofórmio, será misturada imediatamente a 2,5 gramas de sílica-gel 60 (MERCK). Na sequência será feita a evaporação do solvente em rotaevaporador a 45ºC, para obtenção de uma mistura da fração clorofórmica e sílica em forma de pó fino. A amostra adsorvida à sílica será colocada no topo da coluna e, em seguida acrescentada a fase móvel, composta de 70% de clorofórmio e 30% de acetato de etila, até que a linha de frente atinja a base da coluna. Após o desenvolvimento, a coluna será avaliada sob luz natural e luz ultravioleta a 366 nm. Nas faixas onde aparecerem os adsorvatos separados, serão feitas delimitações que, em seguida, serão cortadas com 15 uma lâmina afiada. As fatias cortadas serão solubilizadas com metanol. As sub-frações serão então filtradas em papel de filtro e logo após será realizada a cromatografia em camada delgada. As placas serão reveladas com anisaldeído sulfúrico a quente.