Republic of turkey

Hemaglutinaasyon ve hemaglutinasyon Inhibisyon Testleri

Hemaglutinasyon (HA) Testi

1. 
   96 gözlü V veya U tabanlı mikropleytin çalışılacak gözlerine 25 μl PBS konulur,
   
2. 
   İlk göze 25 μl infektif allantoik sıvı ilave edilir ve iki katlı dilüsyonu yapılarak son göze kadar gidilir.
   
3. 
   Dilüsyon yapılan tüm gözlere tekrar 25 μl PBS ilave edilir,
   
4. 
   Aynı gözlere 25 μl % 1' lik yıkanmış tavuk eritrositi konulur,
   
5. 
   Negatif kontrol (kan kontrol) için ayrılan sıradaki gözlere 25 μl PBS ve üzerine 25 μl % 1' lik tavuk eritrosit süspansiyonu ilave edilir,
   
6. 
   Pleytin kenarlarına hafifçe vurularak iyice karışması sağlanır ve reaksiyonun şekillenmesi için yaklaşık 22⁰C±3⁰C de 40 dakika / 5⁰C±3⁰C ' de 60 dakika ya da kontrol gözündeki eritrositler belirgin bir düğme formasyonu oluşturana kadar beklenir.
   
7. 
   Bekleme süresi sonunda pleyt gözlemlenerek dantela tarzında kalan yani Hemaglütinasyon şekillenen gözlerin varlığı saptanır. HA pozitif reaksiyonu tanımlama, HA (+) virüs izolatına ait sıranın dantela tarzında kalan son gözü %100 HA veren göz olarak kabul edilir. Bu son göz 1 HA ünitesini HAU) temsil eder ve testte kullanılacak olan antijen titrasyonun bu basamağından hassas ve doğru bir şekilde hesaplanır.