Republic of turkey

Hemaglutinasyon Inhibisyon (HI) Testi

1. 
   96 gözlü V veya U tabanlı mikropleytin çalışılacak tüm gözlerine 25 μl PBS konulur,
   
2. 
   Pleytin ilk gözüne 25 μl standart serum konulur,
   
3. 
   Serumun iki katlı seri dilüsyonları yapılır
   
4. 
   her bir göze 4 HAU virüs /antijen süspansiyonundan 25 μl konulur ve pleytin kenarlarına hafifçe vurularak iyice karışması sağlanır. Pleyt yaklaşık 220C±30C de 15-30 dakika / 50C±30C ' de 60 dakika beklenir.
   
5. 
   Bekleme süresi bitiminde tüm gözlere %1’ lik tavuk eritrositinden 25 μl eklenir ve hafifçe karıştırıldıktan sonra eritrositlerin çökmesi için 220C±30C de 40 dakika / 50C±30C ' de 60 dakika negatif kontrol gözündeki bariz bir düğme formasyonu görülünceye kadar beklenir.
   
6. 
   Bu son bekleme süresi bitiminde ise pleyt gözlemlenerek düğme formasyonu oluşan yani Hemaglutinasyonun inhibe olduğu, HI (+) gözlerin varlığı saptanır.
   
7. 
   Testin geçerliliği, testte kullanılan negatif kontrol serumun > ¼ (>log2 2) titre vermemesi ve pozitif kontrol serumun bilinen titresinin bir basamak üstü ya da altında bir titre vermesi ile değerlendirilir.
   

Teşhiste serolojinin önemi, etkilenen kanatlıların beklenen immun durumları ile yakından ilişkilidir. Hemaglutinasyon inhibisyon testinde, serumda antikor titresi 1/16 (24 veya log2 4) ve üzeri olduğunda sonuç pozitif olarak değerlendirilebilir. Hemaglutinasyon inhibisyon testinde, 4 HAU veya 8 HAU antijen kullanılmaktadır. Bu durum sonuçların değerlendirilmesi etkiler, 8 HAU antijen kullanıldığında 1/8 (23 veya log2 3) ve üzeri antikor titresinin tespiti pozitif olarak değerlendirilebilir. Testte dilüe edilmiş antijenin geri titrasyonu mutlaka yapılmalıdır. HI titreleri sürünün bağışıklık durumunu belirlemek içinde kullanılır.

Serolojik olarak kontrol edilen aşılı sürülerde saha virüsu ile bir enfeksiyon durumunun varlığı anemnez bulguları ile doğrulanarak tespit edilebilir, fakat diğer etkenlerden dolayı da bu gibi durumlar oluşabileceğinden dikkatli olunmalıdır. Örneğin, ND aşısı ile aşılanmış hindilerde APMV-3 virüs enfeksiyonlarının titreleri oldukça arttırdığı ortaya konulmuştur. ND virüs antikorlarını tespit eden indirek, sandoviç ve bloking ya da MAb’lar kullanılarak yapılan kompetitive ELISA gibi çeşitli değişik stratejilere bağlı, çok sayıda ticari ELISA kitleri bulunmaktadır. En azından bir kit subunit antijen kullanmaktadır. Genellikle bu testler üretici firma tarafından geliştirilir ve valide edilirler ve bu nedenle kullanırken üretici firmanın talimatlarına göre testi uygulamak önemlidir.