KİMYA ANABİLİM DALI
BAYRAK Bertan Boran
Danışman : Prof. Dr. Refiye YANARDAĞ
Anabilim Dalı : Kimya
Programı : Biyokimya
Mezuniyet Yılı : 2008
Tez Savunma Jürisi : Prof. Dr. Refiye YANARDAĞ
Prof. Dr. Nuriye AKEV
Prof. Dr. Ayşen YARAT
Prof. Dr. Ayşe YUSUFOĞLU
Prof. Dr. Hacı ORAK
Fındıktan (Corylus maxima Miller) Glukoz-6-Fosfat Dehidrogenazın Saflaştırılması ve Bazı Özelliklerinin İncelenmesi
Çalışmamızda, Türkiye’de Giresun ili ve civarında oldukça bol miktarda yetiştirilen fındıktan (Corylus maxima Miller) glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD, E.C. 1.1.1.49) enzimi ilk kez saflaştırıldı ve bazı özellikleri incelendi.
G6PD fındıktan homojenizasyon, amonyum sülfat çöktürmesi ve hidroksilapatit kolon kromatografisi yöntemleriyle 36,2 kat saflaştırıldı. Saflaştırma prosesi süresince sıcaklık +4ºC’de tutuldu. Protein miktar tayini Bradford ve Warburg yöntemlerine göre; enzim aktivitesi ise 37ºC’de Beutler ve Betke yöntemlerine göre, 340 nm dalga boyunda spektrofotometrede tayin edildi.
G6PD enziminin PAGE sonucunda 271 kDa mol ağırlığına karşılık gelen tek aktivite bandı gösterdiği saptandı. SDS-PAGE sonucunda ise bu enzimin oktamer yapıda ve alt birim molekül ağırlığının 33,820 kDa olduğu bulundu.
G6PD koenzim olarak sadece NADP+’yi kullandı. Optimum temperatürünün 37-40ºC arasında olduğu, optimum pH’sının ise 8.0 olduğu saptandı. Enzim tarafından katalizlenen reaksiyonun aktivasyon enerjisi 5.01 kcal.mol-1 olarak bulundu.
Enzimin D-glukoz-6-fosfat ve NADP+ substratlarına karşı Km değerleri sırasıyla 1.9449 mM ve 0.4192 mM; Vmax değerleri ise sırasıyla 0.0514 U/mL ve 0.0428 U/mL bulundu.
G6PD enzim aktivitesi üzerine çeşitli anorganik, organik bileşiklerin ve bazı deterjanların etkileri incelendi. Ayrıca, enzimin depolanma kararlılığı da araştırıldı.
Dostları ilə paylaş: | 
