Universidade estadual de campinas

ANÁLISE MOLECULAR DE PACIENTES COM DISTÚRBIOS DO DESENVOLVIMENTO CORTICAL (DDC)

Daniela A. Souza (Bolsista FAPESP), Fábio R. Torres, Camila F. Lopes, Maria A. Montenegro, Marilisa M. Guerreiro, Prof. Dr. Fernando Cendes e Profa. Dra. Iscia Lopes-Cendes (Orientadora), Faculdade de Ciências Médicas - FCM, UNICAMP
Os DDC são patologias resultantes de defeitos em alguma das fases da embriogênese do córtex cerebral e estão entre as principais causas conhecidas de deficiência mental e epilepsia. O objetivo deste trabalho é analisar a presença de mutações nos genes LIS1, DCX, FLN1 e EMX2, responsáveis por diferentes formas de DDC como o espectro lissencefalia/heterotopia subcortical em banda (LIS/HSB), heterotopia nodular periventricular (HNP) e esquizencefalia. Foram analisados 43 indivíduos. As amostras foram amplificadas por PCR e analisadas pela técnica de SSCP (single strand conformation polymorphism). Apresentaram alteração no padrão de migração no SSCP, cinco indivíduos relacionados com o espectro LIS/HSB no exon 11 do gene LIS1, três indivíduos relacionados com HNP no exon 6 do gene FLN1, três indivíduos relacionados com esquizencefalias no exon 2 do gene EMX2. Foi realizado o seqüênciamento de nove indivíduos de um total de onze com alterações no SSCP. O resultado do seqüênciamento mostrou que todas as alterações encontradas estão descritas na base de dados no National Center of Biotechnology Information (NCBI), com exceção da alteração A1356T (NM_004098) encontrada no gene EMX2. Todas as variantes encontradas são neutras. O sequenciamento dos outros dois indivíduos está em progresso no momento.

Distúrbios do desenvolvimento cortical - Analise de mutações - Epilepsia

B0096

ESTUDO DE LIGAÇÃO COM O EMPREGO DE MARCADORES MICROSSATÉLITES NA BUSCA DO LOCUS PARA A EPILEPSIA DO LOBO TEMPORAL MESIAL FAMILIAL

Marjory Alana Marcello (Bolsista PIBIC/CNPq), Cláudia Maurer-Morelli e Profa. Dra. Iscia Lopes-Cendes (Orientadora), Faculdade de Ciências Médicas - FCM, UNICAMP
Em 2001, Kobayashi e colaboradores identificaram um tipo distinto de Epilepsia do lobo temporal mesial familial (ELTMF) com predisposição genética para a atrofia hipocampal. O objetivo deste trabalho foi a genotipagem de marcadores microssatélites para apoiar a busca genômica randômica na identificação do locus para a ELTMF através do estudo de ligação. Foram selecionadas duas famílias informativas e genotipados 10 marcadores microssatélites nos cromossomos 6 e 15. Duas técnicas foram empregadas: a) genotipagem com marcação radioativa (P³³), nos quais os produtos da PCR foram submetidos ao gel desnaturante, secos a vácuo e expostos a filmes de raio-X com posterior leitura dos padrões de bandas; b) genotipagem por método automático com primers marcados por fluoróforos, nos quais os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese de capilar em equipamento MegaBACE 1000^TM e analisados com o auxílio do software Fragment Profiler v 1.2. Após a genotipagem, os dados foram submetidos a análise de Lod score de dois pontos pelo programa de computador LINKAGE. Lod scores ≥ 3,00 indicam ligação. No presente estudo, as famílias selecionadas apresentaram valores que variaram de -1,26 a -5,07 para θ=0, 00, excluindo a possibilidade destas regiões conterem o gene responsável pela ELTMF.

Genotipagem - Microssatélites - LINKAGE

B0100

IDENTIFICAÇÃO DE UM NOVO LOCUS PARA POLIMICROGIRIA PERISYLVIANA BILATERAL CONGÊNITA (PPBC) NO CROMOSSOMO XQ27 – Q28

Rodrigo Secolin (Bolsista FAPESP), Neide F. Santos, Iara L. Brandão, Marilza L. Santos, Marilisa M. Guerreiro, Prof. Dr. Fernando Cendes e Profa. Dra. Iscia Lopes-Cendes (Orientadora), Faculdade de Ciências Médicas - FCM, UNICAMP
A PPBC é caracterizada por número excessivo de pequenos giros no córtex cerebral, levando os indivíduos a apresentar déficit cognitivo, epilepsia, dificuldades de deglutição e anormalidades na fala. Estudos recentes mapearam um locus para PPBC no cromossomo Xq28. O objetivo do estudo foi analisar o locus candidato Xq28 por meio de análise de ligação genética em 3 famílias segregando PPBC. Amostras de DNA a partir de sangue periférico de 27 indivíduos no total foram coletadas e genotipadas para 18 marcadores microssatélites, flanqueando um intervalo de 42,3 cM no locus Xq27-q28. Os dados da genotipagem foram compilados pelos aplicativos FRAGMENT PROFILE^® e LINKGEN, este último desenvolvido pelo aluno. A análise dos dados foi realizada pelo cálculo de Lod scores (Z) de dois pontos e múltiplos pontos pelo pacote de programas LINKAGE^©. As análises de dois pontos resultaram em Zmax= 3.15 a q = 0.00 para o marcador DXS8045. As análises de múltiplos pontos e de haplótipos delimitaram uma região de 16cM entre os marcadores DXS1205 e DXS8045, localizada na região Xq27-q28. Nossos resultados apontam um novo locus candidato para PPBC, localizada mais centromericamente do que anteriormente relatado.

Genética - Polimicrogiria - Linkage

B0097

TRIAGEM DE MUTAÇÕES PELO MÉTODO DA DESNATURAÇÃO EM CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA PERFORMANCE (DHPLC)

Romênia Ramos Domingues (Bolsista FAPESP), Cláudia V. Maurer-Morelli e Profa. Dra. Iscia Lopes-Cendes (Orientadora), Faculdade de Ciências Médicas - FCM, UNICAMP
A triagem de mutações é uma ferramenta de grande importância que pode ser realizada por vários métodos. Recentemente, um novo método tem sido empregado com sucesso: a triagem de mutações por DHPLC (denaturing high-performance liquid chromatography). Este método automatizado é baseado na detecção de heteroduplexes nos produtos de PCR em condições parciais de desnaturação e permite a identificação de polimorfismos e pequenas deleções e inserções. O objetivo deste estudo foi realizar triagem de mutações em 4 exons do gene NDUFV2 pelo método de DHPLC em pacientes com epilepsia de lobo temporal mesial familiar (ELTMF). Após a amplificação de cada exon por PCR, seus produtos foram desnaturados a 95°C por 3 minutos e permitida a formação de heteroduplexes em temperatura ambiente por 40 minutos. Após essa etapa, 5 µl dos produtos foram colocados em coluna DNASep^®. As condições ideais de gradiente para cada exon foram definidas pelo software WAVEMAKER^TM e a análise das temperaturas pelo sistema WAVE de análise de fragmentos de ácidos nucléicos. Para os exons selecionados, não foram encontradas quaisquer diferenças nos perfis de picos tanto para os indivíduos controle quanto para os pacientes, indicando que ao menos estes exons não são os responsáveis pelo fenótipo encontrado na ELTMF. A análise por DHPLC é um método para a detecção de mutações rápido, eficiente e altamente sensível.

DHPLC - Gene - Mutação

B0101