Glavni urednik

Suradnici iz druge ustanove:
Toni Kolak, doktor med. znanosti, Klinička bolnica Dubrava, Zagreb (50% angažmana na projektu)

Program rada i rezultati na projektu:

Ovim istraživanjima pokazujemo utjecaj proteina transduciranih u stanice na regulaciju staničnog ciklusa. Metodom kloniranja priređeni su vektori TAT-p27, TAT-p27-pt i TAT-p27-N' te eksprimirani u bakterijama za produkciju proteina. Iz bakterijskih taloga pročišćeni su proteini TAT-p27, TAT-p27-pt i TAT-p27-N', koji su se koristili u pokusima transdukcije.

Završili smo istraživanja i objavili rezultate nekovalentne interakcije ubikvitina s IDE (od engl. insulin-degrading enzyme). IDE je metaloproteinaza važna, između ostalog, za razgradnju inzulina ali ima i čitav niz drugih funkcija. Gotovo ništa se ne zna o endogenim proteinima koji mogu doći u interakciju i tako modulirati aktivnost IDE u stanicama. Pročistili smo i okarakterizirali dva proteina iz splenocita miševa oboljelih od leukemije. Ti su proteini odgovorni za interakciju s IDE te inhibiraju IDE-aktivnost. Protein sličan kompetitivnom inhibitoru IDE, opisanom ranije u literaturi, imao je molekularnu masu 14 kDa. Na temelju aminokiselinskog slijeda ustanovili smo da se radi o molekuli sličnoj ubikvitinu. Taj je protein kovalentno priljubljen ostalim intracelularnim proteinima te regulira raznovrsne stanične procese. Ubikvitin inhibira IDE-aktivnost i smanjuje unakrsnu vezu ¹²⁵I-inzulina za IDE. Ta je veza specifična, reverzibilna i ovisana o koncentraciji, a neovisana o ATP. Ubikvitin nije utjecao na unakrsno vezanje ¹²⁵I-inzulina na receptore inzulina, niti na vezanje ¹²⁵I-atrijskog nutriuretičkog peptids (ANP) na njegov receptor - gvanilat ciklazu A. Ovi nalazi sugeriraju novu ulogu ubikvitina, ili pak proteina s ubikvitinskom domenom u regulaciji IDE-funkcije.

Ispitivan je potencijalni antitumorski učinak novosintetiziranih spojeva dobivenih iz laboratorija organske sinteze Fakulteta kemijskog inženjerstva i tehnologije te Zavoda za opću i anorgansku kemiju Prirodoslovno-matematičkog fakulteta u Zagrebu. Ispitano je oko 100 spojeva iz grupe aminokiselinskih derivata hidroksiuree, purinskih i pirimidinskih derivata L-askorbinske kiseline, alkiliranih derivata pirimidina, polioksometalati, derivati benzo-tieno-kinolona, itd. Protutumoski (antiproliferativni) učinak je testiran na pet tumorskih staničnih linija (porijeklom iz pet tipova tumora) te jednoj staničnoj liniji normalnih fibroblasta. Pokazan je snažan antiproliferativni učinak nekih spojeva, primarno derivata kinolona i aminokiselinskih derivata hidroksiuree.

Nadalje, novosintetizirani spojevi: benzo(beta)tieno(2,3-c) kinoloni; 1-aminociklopropan-1-karboksilna kiselina i 1-amino-1-hidroksimetilciklopropan supstituirani purinski spojevi; jodinirani i fluorinirani 9-(2-hidroksipropil) i 9-(2-hidroksietoksi) metil purinski nukleozidi te supstituirani benzidolil-furil-fenil akrilati i naftol(2,1-beta) furan karboksilati evaluirani su za potencijalno antitumorsko djelovanje na staničnim linijama karcinoma gušterače (MiaPaCa2), dojke (MCF7), grlića maternice (HeLa), grkljana (Hep2), debelog crijeva (CaCo-2) i melanoma (HBL) te normalnih fibroblasta (WI38). Neki od testiranih spojeva pokazali su značajno antitumorsko djelovane, inhibirajući rast tumorskih stanica. Postoje pokazatelji da djelotvorni spojevi induciraju apoptozu.

Praćen je utjecaj CD40L na B-stanice kronične limfocitne leukemije (B-CLL). Pokazano je da je CD40L faktor preživljenja za B-CLL i u kombinaciji s IL-4 inducira fosforilaciju pRb proteina, povećava ekspresiju cyc D3 i smanjuje ispoljenost proteina p27. Postoje neke indikacije da dolazi do progresije staničnog ciklusa.

Research programme and results:

This investigation is amed to show the effect of transduced proteins into the cells on regulation of the cell cycle. We cloned the vectors TAT-p27, TAT-p27-pt i TAT-p27-N' and after transformation of bacteria, the proteins were exspressed in bacteria. Using affinity chromatography and gel filtration, the proteins TAT-p27, TAT-p27-pt i TAT-p27-N' were purified and used for transduction.

Insulin-degrading enzyme (IDE) is a metalloprotease implicated in insulin degradation and suggested to have a variety of additional functions, including the clearance of amyloid beta peptides of Alzheimer's disease. Little is known about endogenous proteins that may interact with and modulate IDE's activity in the cell. We purified and characterized two proteins from mouse leukemic splenocytes that interact with IDE and inhibit its insulin-degrading activity. A protein of 14 kDa was similar to a competitive IDE inhibitor reported previously. The major inhibitor was identified by amino acid sequencing as ubiquitin, a protein that is post-translationally covalently attached to other intracellular proteins and regulates diverse cellular processes. Ubiquitin inhibited insulin-degrading activity of IDE and diminished crosslinking of ¹²⁵I-insulin to IDE in a specific, concentration-dependent, reversible, and ATP-independent manner. Ubiquitin did not affect the crosslinking of ¹²⁵I-insulin to insulin receptors or of ¹²⁵I-atrial natriuretic peptide (ANP) to its receptor guanylate cyclase-A. These findings suggest a novel role for ubiquitin or perhaps proteins with ubiquitin-like domains in regulating the function of IDE.

We also investigated and published the role of the IGF 2 ligand and its receptors, IGF 1 and IGF 2 types in human gastric cancer. Our findings suggest that members of the IGF family are involved in the pathogenesis of gastric cancer, probably by autocrine/paracrine stimulation of cell growth. Such tumors might be excellent candidates for therapeutic strategies aimed at interference with this pathway.

Potential antitumor effect of newly synthesized small molecules, which were obtained mostly from organic synthesis laboratories of Faculty of Chemical Engineering and Technology, and Laboratory of General and Inorganic Chemistry, Faculty of Natural Sciences. More than 100 novel compounds from the following chemical groups were tested: hydroxyurea aminoacid amids, purine and pyrimidine derivatives of L-ascorbic acid, alkylated derivatives of pyrimidines, polyoxometallates, benzo-tieno-quinolones, phenatridines, etc. The antiproliferative activity was tested on five tumor cell lines (derived from five different tumor types) and a normal fibroblast cell line. Pronounced antiproliferative activity of some of the quinolons derivatives, as well as of hydroxyurea aminoacid derivatives was shown.

Furthermore, new synthesised compounds: benzo(beta)thieno(2,3-c)quinolones; purine substituted 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acids and 1-amino-1-hydroxymethylcyclopropane; iodinated and fluorinated 2-(2-hydroxypropyl) and 9-(2-hydroxyethoxy)methyl purine nucleoside; substituted benzimidazolyl-furyl-phenyl-acrylates and naphthol (2,1-beta) furan-carboxylates were evaluated on their antitumor activities, using different carcinoma cell lines: pancreatic carcinoma (MiaPaCa2), breast carcinoma (MCF7), cervical carcinoma (HeLa), laryngeal carcinoma (Hep2), colon carcinoma (CaCo-2), melanoma (HBL) and normal human fybroblasts (WI38). Some of compounds exhibited a strong cytotoxic effect on tumor cell lines. There is some indication that these compounds induced apoptosis.

Influence of CD40L on B-CLL was monitored. The CD40L is survival factor for B-CLL and in combination with IL-4 induced a phosphorylation of pRb, increased level of cyc D3 and decreased level of p27 protein. In some samples, the progression of cell cycle was noticed.

Oznaka: 0098094

REGULACIJA EKSPRESIJE EKTOPEPTIDAZA I OPIODNIH RECEPTORA

REGULATION OF ECTOPEPTIDASES AND OPIOID RECEPTORS EXPRESSION
Voditelj/ica projekta: dr. sc. Jelka Gabrilovac

Tel. ++385 1 4561 011   e-mail: [e-mail]

Suradnici na projektu:
Davorka Breljak, doktorica biol. znanosti, viši asistent, znanstvena novakinja
Barbara Čupić, dipl. inž. biologije, znanstvena novakinja
Irena Martin Kleiner, doktor kem. znanosti, znanstvena suradnica
Tamara Stipčević, doktor biol. znanosti, viši asistent

Tehnički suradnici:
Margareta Cvetkovski, tehničarka

Suradnici iz druge ustanove:
Milivoj Boranić, doktor med. znanosti, znanstveni savjetnik, konzultant

Program rada i rezultati na projektu:

Membranske peptidaze (ektopeptidaze) igraju važnu ulogu u regulaciji lokalne koncentracije različitih signalnih peptida: faktora rasta, peptidnih hormona, kemokina i citokina, što se ostvaruje putem njihove katalitičke aktivnosti. Pored toga, nedavno je pokazano da membranske peptidaze mogu funkcionirati i poput receptora, primajući signale od zasad još nedefiniranih liganda i prenoseći ih u unutrašnjost stanice. U nastavku ranijih istraživanja regulacije ekspresije neutralne endopeptidaze (NEP; CD10) na nezrelim B-limfocitima (stanična linija NALM-1), u proteklom smo razdoblju ispitivali prisutnost i ulogu ektopeptidaze di-peptidil peptidaze IV (DPPIV; CD26) na nezrelim T-limfocitima (stanična linija R1.1). Pokazali smo jaku ekspresiju DPPIV na nezrelim stanicama T-limfocitinog porijekla. Receptorska (TCR) aktivacija T-limfocita rezultirala je pojačanom ekpresijom i membranskog proteina (CD26) i njegove enzimske (DPPIV) aktivnosti, ukazujući na fiziološko značenje DPPIV na nezrelim T-limfocitima. Nadalje, pokazali smo da dinorfin-A, endogeni ligand kapa opiodnih receptora (KOR) djeluje kao ne-supstratni inhibitor DPPIV. Snizujući aktivnost DPPIV dinorfin-A bi indirektno mogao utjecati na aktivnost drugih signalnih peptida, koji su podložni razgradnji DPPIV, kao što su supstanca-P, kemokin RANTES, endogeni opioidni peptidi endomorfin-1 i endomorfin-2. Na staničnoj liniji R1.1, koja selektivno ispoljava kapa opiodne receptore (KOR) u visokoj gustoći, ispitali smo ulogu slobodnog unutarstaničnog Ca++ u signalizaciji KOR. Pri tome smo koristili sintetski KOR-ligand, U-69593. Pokazali smo da KOR na nezrelim T-limfocitima u signalizaciji koriste Ca++. Ligacija KOR povezana je s promjenom razine slobodnog unutarstaničnog Ca++, i to ovisno o stupnju aktivacije stanica: u mirujućim stanicama je snižena, a u aktiviranim stanicama povišena.

Research programme and results:

The aims of our investigation were to examine surface expression of CD26 and the corresponding enzyme activity of dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) on the cells of immature murine T-cell line, R1.1. The data obtained have shown that R1.1 cells express high density of surface CD26, as compared to normal thymus cells. This was associated with strong enzyme activity, which, based on substrate and inhibitor specificity, corresponded to DPPIV. In addition, the effect of dynorphin-A(1-17), an endogenous opioid peptide with selectivity for kappa opioid receptors (KOR) on DPPIV of R1.1 cells, was also examined. Dynorphin-A(1-17) down-regulated DPPIV in a dose-dependent manner, with the potency similar to that of substance P, a known natural DPPIV substrate.Thus, cells of immature murine T-cell line, R1.1, exert strong DPPIV enzyme activity, which could be down-regulated in the presence of dynorphin-A(1-17) by mechanism that presumably includes non-substrate inhibition. By down-regulating DPPIV, dynorphin-A(1-17) may indirectly affect activity and/or specificity of natural substrates of DPPIV, such as substance P, RANTES, and endomorphins.

The role of free intracellular calcium in KOR signalling was also examined. T-lymphocyte R1.1 cell line, selectively expressing high density of KOR, and a synthetic KOR-selective ligand, U-69593 served as a model. The data obtained have shown that free intracellular calcium is involved in signalling of KOR expressed on R1.1 cell line. Namely, ligation of KOR with U-69593 altered the level of free intracellular calcium, depending on the state of cell activation: in resting cells it was decreased, whereas in activated cells, it was enhanced.

Oznaka: 0098095

MOLEKULARNI MEHANIZMI NASTANKA NEUROENDOKRINIH TUMORA

MOLECULAR MECHANISMS IN THE PATHOGENESIS OF NEUROENDOCRINE TUMORS
Voditelj/ica projekta: dr. sc. Koraljka Gall-Trošelj

Tel. ++385 1 4560 972   e-mail: [e-mail]

Suradnici na projektu:
Maša Katić, doktorica biol. znanosti, viši asistent, znanstvena novakinja
Ante Škrabalo, dipl. inž. molekularne biologije, asistent, znanstveni novak

Suradnici iz druge ustanove:
Toni Kolak, doktor med. znanosti, Klinička bolnica Dubrava (50% angažman na projektu)

Program rada i rezultati na projektu:

U drugoj godini istraživanja nastavljeno je prikupljanje neuroendokrinih tumora i na svim prikupljenim uzorcima napravljene su planirane analize. Ovo se prvenstveno odnosi na parafinske rezove s obzirom na to da je istraživanje na razini RNA bilo ograničeno izuzetno malenim brojem neuroendokrinih tumora koji su dijagnosticirani tijekom 2003. godine. Nastavljena su istraživanja na karcinomima želuca i grkljana, poglavito ispitivanja statusa genomskog upisa (IGF-2, H19) na dodatno pristiglim tkivima tumora. U tijeku je istraživanje koje se bazira na usporednoj analizi biopsija sluznice želuca i karcinoma larinksa kao korak u ispitivanju trenutno teško objašnjive činjenice da bakterija H. pylori uistinu naseljava planocelularni karcinom grkljana u nekih pacijenata. Na karcinomima želuca, u kojima smo dokazali gubitak genomskog upisa, nastavljeno je istraživanje uključivanja pojedinog promotora gena IGF-2. Dokazali smo da se promotori P1 i P4 ne uključuju nikada te da je aktivacija promotora P2 i P3 ključna u gubitku kontrole genomskog upisa u karcinomima želuca. Potaknuti zanimljivim opažanjem iz područja ortopedije: neki bolesnici iznimno dobro prihvaćaju ugrađenu endoprotezu kuka (stabilna proteza i do 20 godina), dok u drugih dolazi do odbacivanja u vremenskom periodu do 5 godina postavljena je hipoteza da bi možda polimorfizmi u promotorsmim regijama nekoliko odabranih gena (TNF-alfa, TGF-beta, interleukin 6) mogli biti odgovorni za pojavu ovog fenomena. Ova istraživanja su u tijeku. Uključili smo se i u analizu sakrokokocigealnih teratoma rane dječje dobi i u dostupnim tumorima ispitali status gena p53.

Research programme and results:

We have continued with collecting the neuroendocrine tumors, but only paraffine sections. Analyses were done as proposed. It was not possible to make any study at the level of RNA, as we had criticaly low number of samples of bad quality. We have also continued our research on laryngeal and gastric cancer tumor samples, mostly on the genes IGF-2 and H19. At the moment, we are performing comparative analyzes (stomach tissue vs. laryngeal cancer) as we further proved that H. pylori indeed colonizes laryngeal tumors. In gastric cancer, we have shown that promoters P1 and P4 are not activated and so far, we have shown that only activation of P3 and P4 contributes to LOI in these tumors. The well addressed problem from the ortopedic clinic encouraged us in our research on gene polymorphisms. Some patients with the hip implant for unknown reason reject it relatively soon after the surgery, while another group keep it for much longer period of time (up to 20 years). For that reason, we have started with research on gene polymorphism in TNF-alpha, TGF-beta and interleukin 6 genes. This research is in action. We have also analyzed the p53 status in neonatal sacrococcigeal tumors.

Oznaka: 0098096

OKSIDATIVNI/ANTIOKSIDATIVNI STATUS NAKON PRIMJENE OPIOIDA I OPIJATA

THE RELEVANCE OF OPIOID/OPIATES APPLICATION ON OXIDATIVE/ANTIOXIDATIVE STATUS
Voditelj/ica projekta: dr. sc. Tatjana Marotti

Tel. ++385 1 4561172   e-mail: [e-mail]

Suradnici na projektu:
Tihomir Balog, doktor biol. znanosti, znanstveni suradnik
Borka Kušić, doktorica biol. znanosti, znanstvena suradnica
Sandra Sobočanec, magistrica biol. znanosti, asistent, znanstveni novak
Ana Šarić, dipl. inž. ekologije, znanstveni novak

Višnja Šverko, doktorica biol. znanosti, znanstveni savjetnik

Tehnički suradnici:
Vesna Matešić, kemijska tehničarka

Program rada i rezultati na projektu:

Nitrički oksidi koje luče ljudski neutrofili i monociti vrlo su važni biološki modulatori i signalne molekule. Stimulacija endomorfinskog receptora endomorfinom ujedno je i poticaj za lučenje nitričkih oksida. Stoga u našem radu istažujemo ulogu akutne i kronične primjene enkefalina i endomorfina na lučenje nitričkih oksida in vitro u kulturi ljudskih neutrofila i monocita, kao i u kojoj mjeri su u učinak tih peptida uključeni hidrolitički enzimi. Uvođenjem tih ispitivanja, a koristeći tek nedavno konstruiran tzv. "real-time" NO-amperometar, uključujemo se u najnovija istraživanja nitričkih oksida na ljudskim stanicama. Spoznaje tih procesa imaju potencijalni klinički značaj zbog integriranog sustava navedenih medijatora u traumi i pridruženim upalnim procesima. U izvještajnom periodu rezultati projekta pokazali su da endomorfini 1 i endomorfion 2 različito stimuliraju oslobađanje nitričkog oksida u kulturi mišjih makrofaga J774 in vitro i peritonealnim makrofazima tretiranih in vivo u miševa CBA soja. Isto tako, upotrebom specifičnih inhibitora različitih tipova sintetaze nitričkog oksida utvrdili smo tip enzima koji je aktiviran endomorfinom.

Research programme and results:

Nitric oxides are also released via stimulation of endomorphine receptor. Thus, we investigate the role of acute and chronic application of enkephalins and endorphins on nitric oxide release in human neutrophils and monocyte cell-lines in vitro, as well as the involvement of hydrolitic enzymes in these processes. By performing these investigations using newly constructed NO-amperometer (NO MARK-II), we are able to measure the release of nitric oxides from human neutrophils and monocyte cell lines. The definition of these processes would be of possible clinical value due to integrated system of proposed mediators in trauma and associated inflammatory processes. Results of our investigations in this period of project showed that endomorphin 1 and endomorphine 2 differently regulate release of nitric oxide from mouse macrophages in cell culture (J774) in vitro and mouse peritoneal macrophages treated with opioide petides in vivo. Also, using specific inhibitors for different type of nitric oxide sinthase (NOS) we demonstrate type of NOS activated with endomorphins.

Oznaka: 0098097

MODULIRANJE IMUNOLOŠKOG ODGOVORA BIOAKTIVNIM PEPTIDIMA

MODULATION OF IMMUNOLOGICAL RESPONSE BY BIOACTIVE PEPTIDES
Voditelj/ica projekta: dr. sc. Biserka Pokrić

Tel. ++385 1 46 80 19   e-mail: [e-mail]

Suradnici na projektu:
Nikola Štambuk, doktor med. znanosti, viši znanstveni suradnik


Program rada i rezultati na projektu:

S ciljem odabiranja bioaktivnih peptida za modulaciju imunološkog odgovora razvijene su nove metode za molekularno i gensko definiranje bioaktivnih peptidnih motiva, te određivanje sekundarne proteinske strukture modifikatora bioloških odgovora. Model rezonantnog prepoznavanja (RRM) proteinske bioaktivnosti primjenjen je za predviđanje sekundarne strukture proteina. Metoda se temelji na fizikalnom i matematičkom modelu elektronsko ionskog interakcijskog pseudopotencijala (EIIP). Razrađen je binarn algoritam za jednostavno, brzo i točno predviđanje alfa i beta-proteinskih struktura iz primarnih aminokiselinskih i nukleotidnih sekvenci, korištenjem osobnog računala. Metoda se temelji na vezi polarnosti aminokiselinskih molekula i binarno kodiranih fizikalno-kemijskih svojstava nukleotidnih baza.

Restrikcijskom analizom terenskih izolata virusa zarazne bolesti burze (VZBB) i usporedbom dobivenih podataka s podacima iz baze podataka, nađeni su peptidni djelovi proteina VP2 odgovorni za infektivnost virusa, kao i za moduliranje imunološkog odgovora. Dobiveni rezultati podloga su za odabir soja za proizvodnju cjepiva za učinkovitu zaštitu od novootkrivenih, veoma patogenih terenskih izolata.

Računalni programi za modeliranje te metode mašinskog učenja i umjetne inteligencije, korišteni su za analizu biomedicinskih podataka. Programi su testirani na biokemijskim i kliničkim podacima te je potvrđeno da se mogu koristiti za određivanje učinkovitosti novih ljekova i terapijskih postupaka, kao i za optimizaciju testova.

Research programme and results:

In order to select bioactive peptides responsible for modulation of immunological responses and the detection of the secondary protein structure of modulators of biological responses, new methods required for molecular and genetic definition of bioactive peptide motifs are developed.

The Resonant Recognition Model (RRM) of protein bioactivity is applied to the protein secondary structure prediction. The method is based on the physical and mathematical model of the electronic ionic interaction pseudopotential (EIIP).

A binary coding algorithm for simple, quick and accurate prediction of alpha and beta-protein structures from primary amino acid and nucleotide squences was developed for personal computer. The method is based on the polarity of amino acid molecules and physico-chemical properties of binary coding nucleotide bases.

The peptide sequences responsible for infectivity and modulation of immunological responses of field isolates of the infectious bursal disease viruses (IBDV) were determined by the restriction analysis and compared with the data from the date base. The results will be used for the selection of an appropriate vaccine strain in order to design efficient vaccines against newly detected, very virulent IBDV field isolates.

The computer programs and methods of machine learning and artificial intelligence were applied for modelling and analysis of biomedical data. The applicability of the programs was proved on biochemical and clinical data. It was found that they are suitable for the evaluation of the efficacy of new drugs and therapeutic procedures, as well as for optimisation of the test procedures.

Oznaka: 0098098

KLONIRANJE STANICA EMBRIJA U STRUKTURE SLIČNE OTOČIĆIMA

EMBRYONIC CELL PRODUCTION OF PANCREATIC-LIKE ISLETS
Voditelj/ica projekta: dr. sc. Mirko Hadžija

Tel. ++385 1 1507   e-mail: [e-mail]

Suradnici na projektu:
Korolija Marina, dipl. inž. biologije
Marijana Popović Hadžija, doktorica biol. znanosti
Milivoj Slijepčević, doktor med. znanosti, redovni profesor, znanstveni savjetnik

Tehnički suradnici:
Marina Marš, stručni suradnik

Suradnici iz druge ustanove:
Ivan Kuvačić, doktor med. znanosti, redovni profesor, Klinika za ženske bolesti i porode, Zagreb
Željko Metelko, doktor med. znanosti, redovni profesor, Sveučilišna klinika "Vuk Vrhovac", Zagreb

Program rada i rezultati na projektu:

Mutacije tumor supresorskog gena DPC4 određivane su u uzorcima hrvatskih pacijenata oboljelih od sporadičnog karcinoma debelog crijeva (60 uzoraka) i karcinoma bubrega (32 uzorka). Gubitak jednog alela određivan je analizom tri specifična ponavljajuća sljeda nukleotida smještena u blizini ovog gena. Promjena jednog nukleotida, koja ima za posljedicu otvaranje/zatvaranje poznatog restrikcijskog mjesta, ispitana je u eksonima 2, 8, 10 i 11 koji pripadaju evolucijski sačuvanom dijelu gena. Studija je, nadalje, proširena na svih 11 eksona ispitujući postojanje jednolančanih konformacijskih polimorfizama.

Analizom tri ponavljajuća nukleotidna sljeda u svim uzorcima dobiven je visoki stupanj informativnosti; 97% informativnih uzoraka adenokarcinoma debelog crijeva i 94% informativnih uzoraka karcinoma bubrega. Gubitak jednog alela gena DPC4 zabilježen je u čak 45% uzoraka tumora debelog crijeva, dok je ista pojava zamijećena u svega 13% oboljelih od karcinoma bubrega. Ujedno je u uzorku tumora debelog crijeva nađena, i sekvencioniranjem potvrđena, delecija 20 parova baza u eksonu 11 ovog gena, što predstavlja novootkrivenu mutaciju.

Rezultati sugeriraju da inaktivacija gena DPC4 gubitkom jednog alela značajno pridonosi razvoju karcinoma debelog crijeva, a u manjoj mjeri karcinoma bubrega. Mutacije unutar kodirajuće regije ovog gena nisu učestale u oboljelih od karcinoma debelog crijeva i karcinoma bubrega u hrvatskoj populaciji.