O’zbekiston respublikasi oliy va o’rta maxsus ta’lim vazirligi mirzo ulug’bek nomidagi o’zbekiston milliy universiteti biologiya fakulteti

Geterodimerik restriksion endonukleaza R.BbvCIning saytga xos DNK-nicking mutantlari
BbvCI cheklovchi fermenti dupleks DNKni yetti tayanch-juft assimetrik tanib olish ketma-ketligida ajratadi,shunday qilib:CCTCAGC/GCTGAGG-->CC--TCAGC/GC--TGAGG.Biz R.BbvCIning R(1)va R(2)ikki xil subbirlikdan iborat ekanligini ko'rsatamiz;har bir bo'linmada DNK zanjiri gidrolizi uchun katalitik joy mavjudligi;va bu saytlar mustaqil va o'ziga xos tarzda harakat qiladi.
O'z navbatida,har bir katalitik joy mutagenez orqali dimerik fermentlarni hosil qilish uchun faollashtirildi,ularda faqat bitta joy ishlaydi.O'zgartirilgan fermentlar DNKni parchalash o'rniga tanib olish ketma-ketligining faqat bitta ipini gidroliz qildi.R(1)subbirligidagi katalitik joy funksionalligicha qoladigan fermentlar ketma-ketlikning pastki qatoriga kirib,CCTCAGC/GC--TGAGG hosil qiladi,R(2)bo'linmasidagi katalitik joy funktsional bo'lib qolganlar esa CC--TCAGC/GCTGAGG ni hosil qilib,yuqori ipni egallab oldilar.Ushbu DNK-nicking fermentlari DNKni ta'mirlash,rekombinatsiya va replikatsiyani o'rganish,shuningdek,DNKning parchalanishi,sintezi va kuchaytirilishi kabi niklardan boshlanadigan laboratoriya protseduralari uchun foydali bo'lishi mumkin.

Xulosa
BbvCI ko'rsatilganidek ,5′-CC↓TCAGC-3'/5'-GC↓TGAGG-3' assimetrik DNK ketma -ketligini ajratadi.Ko'pgina II turdagi cheklovchi fermentlar bir xil bo'linmalardan iborat bo'lsa-da,BbvCI ikki xil bo'linmaga ega:R 1 ,GC↓TGAGG da ta'sir qiladi;va CC↓TCAGC da harakat qiluvchi R 2 .R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 − yoki R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 − bo‘linmalarida nuqsonlari bo‘lgan BbvCI ning ba’zi mutantlari mahalliy bo‘linma tomonidan hujumga uchragan faqat bitta ipni ajratib oladi.Proteinning turli konsentrasiyalarida analitik ultratsentrifugalashda yovvoyi tipdagi va mutant BbvCI fermentlari ko'p yig'ilgan,ammo R 1 R 2DNKning parchalanish reaktsiyalarida ishlatiladigan konsentratsiyalarda geterodimerlar
Xulosa qilib aytadigan bo'lsak,Nt.BbvCInicking DNK endonukleazasi yordamida PCR qo'shimchalari bizning o'zgartirilgan vektorimizga yuqori samaradorlik bilan yig'ilishi mumkin.An'anaviy klonlash usullari bilan solishtirganda,NiDE usuli bir qator afzalliklarga ega.Birinchidan,NiDE klonlash usuli juda samarali.Ikkinchidan,bu vaqtni tejaydi,chunki konstruktsiyalar ~ 2-3 soat ichida bajarilishi mumkin.Nihoyat,texnika kamroq mehnat va xarajat talab qiladi,chunki hazm qilingan vektor va insertni tozalash endi talab qilinmaydi.