10-rasm. Ro'yxatga olingan signal darajasining tahlil qilinadigan moddaning konsentratsiyasiga bog'liqligini kalibrlash grafigi; a) tahlil qilinayotgan birikmaning o'ziga xos immun kompleksini aniqlash; b) qolgan bepul maxsus bog'lash joylarini aniqlash
Birinchi yondashuv ferment yorlig'ining hosil bo'lgan immun komplekslarida joylashishini o'z ichiga oladi. Shu munosabat bilan, antikor-antigen o'zaro ta'siri natijasida hosil bo'lgan immun komplekslar soni aniqlangan signal darajasiga to'g'ridan-to'g'ri proportsional bo'ladi, shuning uchun yuqori qayd signali mos keladi.
belgilangan immun kompleksning yuqori konsentratsiyasi. Bunday holda, qayd etilgan signal darajasining tahlil qiluvchi moddaning konsentratsiyasiga bog'liqligi bo'lgan kalibrlash grafigi ortib borayotgan funktsiya bilan tavsiflanadi (10-rasm a).
Yorliqli qolgan bo'sh bog'lash joylari aniqlangan taqdirda, kalibrlash egri chizig'i qayd etilgan signalning pasayishini tavsiflaydi. Optik zichlikning maksimal qiymati bu holda yorliqli komponentning nol konsentratsiyasiga to'g'ri kelishi kerak va konsentratsiyaning oshishi bilan optik zichlikning qiymati kamayadi (10-rasm, b).
Keyingi muhim tasniflash mezoni tahlilning birinchi bosqichida ishlatiladigan reagentlar turidir. Ushbu mezonga muvofiq, Elishay usullari quyidagilarga bo'linadi:
- raqobatdosh bo'lmagan - tahlilning birinchi bosqichida eritmada faqat tahlil qilingan antigen va o'ziga xos antikorlar mavjud bo'lgan usullar guruhi;
- raqobatbardosh - tahlilning birinchi bosqichida tahlil qilinadigan birikma, uning ferment belgisiga ega analogi va maxsus bog'lanish markazlari bir vaqtning o'zida eritmada mavjud bo'lgan usullar guruhi. Bunday holda, tahlil qilingan birikma va uning analogi muayyan bog'lanish joylari bilan o'zaro ta'sir qilish uchun bir-biri bilan raqobatlashadi.
Raqobatdosh bo'lmagan usullarni o'tkazishning zaruriy sharti reaktsiya komponentlarining nisbatlariga rioya qilishdir: 1-turdagi usullar uchun o'ziga xos bog'lanish joylarining konsentratsiyasi tahlil qilinadigan moddaning konsentratsiyasidan sezilarli darajada yuqori bo'lishi kerak; 2-turdagi usullar uchun tahlil qiluvchi moddaning kontsentratsiyasi o'ziga xos bog'lanish joylarining konsentratsiyasidan kattaroq yoki shunga o'xshash bo'lishi kerak.
Raqobatbardosh tahlil usulini o'tkazishning zaruriy sharti tahlil qilinadigan birikma va uning analogining umumiy kontsentratsiyasiga nisbatan o'ziga xos bog'lanish joylarining yo'qligi hisoblanadi.
Elishay usullarini tasniflashning keyingi mezoni turli bosqichlarda o'tkaziladigan reaktsiyalar turidir. Ushbu mezonga muvofiq usullar quyidagilarga bo'linadi:
- bir jinsli - agar tahlil davomida olib boriladigan barcha reaktsiyalar eritmada sodir bo'lsa, ya'ni. bu holda, boshlang'ich va natijada reaktsiya komponentlarini ajratish yo'q;
- heterojen - agar tahlil ikki fazali tizimda amalga oshirilsa, fazalarga bo'linish tahlilning istalgan bosqichida sodir bo'lishi mumkin.
Geterogen usullarning majburiy komponenti - bu boshlang'ich (reaksiyaga kirmagan) va hosil bo'lgan reaktsiya komponentlarini ajratish. Yorliqli erkin va bog'langan reagentni ajratish qattiq faza yordamida yoki immun komplekslarni cho'ktirish orqali sodir bo'lishi mumkin. Qattiq faza sifatida odatda plastik sirt ishlatiladi.
Geterogen usullar birinchi bosqichning xarakteriga ko'ra qattiq fazali va bir jinsli-geterogenga bo'linadi. Qattiq faza - agar birinchi bosqichda antigen yoki antikor qattiq sirtda immobilizatsiya qilingan bo'lsa. Gomogen-heterojen - agar birinchi bosqichda antigen va antikorning o'zaro ta'siri eritmada sodir bo'lsa va shundan keyingina hosil bo'lgan immun kompleks qattiq sirtda immobilizatsiya qilinadi.
Shunday qilib, ko'p sonli tahlil variantlari tadqiqotchiga vazifalarga mos keladigan metodologiyani tanlash imkonini beradi.