Xashimova iqbolxonning

4.3. Elishay sxemalari (ELISA variantlari)
Hozirgi vaqtda eng keng tarqalgani qattiq fazali heterojen immunoassay - Elishay (ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlil).
Ushbu usul uchun uchta asosiy variant mavjud:
1. to'g'ridan-to'g'ri (to'g'ridan-to'g'ri Elishay)
2. bilvosita (bilvosita Elishay)
3. sendvich usuli (Sendvich Elishay)
To'g'ridan-to'g'ri Elishay - bu usul Elishayning eng oddiy variantidir. Ushbu usulning mohiyati quyidagicha:
- birinchi bosqichda buferda erigan tahlil qilingan antigen plastik quduqqa (qattiq faza) kiritiladi. Bufer sifatida karbonat/bikarbonat tampon tizimi pH (9,6) yoki neytral fosfat tampon (PBS) ishlatilishi mumkin. Kerakli shart - bufer eritmalarining tozaligi, ulardagi boshqa begona oqsillarning yo'qligi, shuning uchun barcha bufer eritmalar deionlangan suvda tayyorlanishi kerak. Keyin, ma'lum vaqt davomida, antigen quduqlarda inkubatsiya qilinadi. Vaqt va harorat muhim parametrlar emas, qoida tariqasida, bu shartlar standartlashtirilgan va standart aniqlash protokollarida ko'rsatilgan. Standart inkubatsiya harorati 37 ° C dir. Inkubatsiya davrida antigen qattiq fazada immobilizatsiya qilinadi. Inkubatsiyadan keyin erkin (immobilizatsiyalanmagan) antigen molekulalarini olib tashlash uchun yuvish amalga oshiriladi. Yuvish jarayoni uchun neytral tampon eritmasi (masalan, fosfat) ishlatiladi (2-bosqich);
- shundan so'ng, plastik yuzada immobilizatsiya qilingan antigenga ferment bilan konjugatsiyalangan antikorlar qo'shiladi (3-bosqich), bu antigenga xos bo'lgan va u bilan bevosita bog'lanadi.
- inkubatsiyadan keyin yuvish jarayoni yana amalga oshiriladi va fermentga mos keladigan substrat quduqlarga qo'shiladi. Natijada, rangli birikma paydo bo'lishi bilan fermentativ reaktsiya paydo bo'ladi (5). Rang rivojlanishidan keyin ma'lum vaqt o'tgach, fermentativ reaktsiya inhibitor reagent (6) qo'shilishi bilan to'xtatiladi.
- oxirgi bosqich - spektrofotometrik uskunalar yordamida rangli eritmaning optik zichligini miqdoriy aniqlash.
Bilvosita Elishay Elishayning turli xil variantlarida qo'llaniladigan ikkinchi asosiy usuldir. Ushbu usulni amalga oshirish tartibi rasmda ko'rsatilgan.
- bu usulning dastlabki (1 va 2) bosqichlari to'g'ridan- to'g'ri Elishay bosqichlariga to'g'ri keladi , ya'ni. bu bosqichlarda antigen qattiq fazada immobilizatsiya qilinadi.


Shakl 11. To'g'ridan-to'g'ri Elishay sxemasi
- keyingi bosqichda quduqlarga fermentativ belgi bilan bog'liq bo'lmagan o'ziga xos antikorlar kiritiladi. Antikorlar maxsus tamponda eritilishi kerak, bu antikorlarning qattiq faza tarkibiy qismlariga o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishiga to'sqinlik qiladi. Inkubatsiya va yuvishdan keyin (bog'lanmagan antikorlarni olib tashlash) quduqda faqat bog'langan antigen-antikor immun komplekslari qoladi (4).
- keyingi bosqichda quduqlarga ferment bilan bog'liq bo'lgan anti-turga qarshi immunoglobulin antikorlari qo'shiladi. Bu antikorlar antijen bilan emas, balki tahlil qilingan antigenga xos antikorlar bilan bog'lanadi (6). Turlarga qarshi antikorlar (ko'pincha ikkinchi antikorlar deb ataladi) antijen bilan immunizatsiya qilingan hayvonlarning immunoglobulinlariga qarshi ishlab chiqariladi.