Predgovor

---

Oznaka: 0098078

STRUKTURA, FUNKCIJA I REGULACIJA PLAZMINOGENSKIH SERINSKIH PROTEAZA

STRUCTURE, FUNCTION AND REGULATION OF PLASMINOGEN SERINE PROTEASES
Voditelj projekta: dr. sc. Branko Brdar

Tel. ++385 1 4561 093   e-mail: [e-mail]

Suradnici
Maja Matulić, doktorica biol. znanosti, znanstvena suradnica
Vanjski suradnici
Branko Brdar, doktor biok. znanosti, znanstveni savjetnik u mirovini

Program rada i rezultati na projektu:

Konstruirali smo sojeve HeLa stanica otporne na difterijski toksin (DT) na način da smo metodom ciljne mutageneze histidinski prekursor diftamida (His 715) u ljudskom elongacijskom faktoru-2 (EF-2) supstituirali leucinom, metioninom, asparaginom ili glutaminom. Ti bi stanični HeLa sojevi trebali podržati rast replikacijski defektnih HIV-viriona koji sadrže virusom regulirani DT-A gen (Brdar i sur., Croatian Medical Journal 43, 591-597, 2002), i to u prisutnosti visoke unutarstanične koncentracije DT-A fragmenta. Tako proizvedeni infektivni virioni HIV-a mogli bi specifično i selektivno inficirati CD4-pozitivne stanice i koristiti se u genskoj terapiji HIV-infekcija.

Research programme and results:

We constructed diphtheria toxin (DT)-resistant HeLa cell lines by engineering the toxin-resistant form of its specific substrate, human elongation factor-2 (EF-2) (Ivanković et al., Mutation Res. 609, 34, 2006.). These DT-resistant HeLa cells bearing each of the EF-2 mutations should prove valuable hosts and capable of supporting the multiplication of replication defective HIV virions encoding DT (Brdar i sur., Croatian Medical Journal 43, 591-597, 2002).

---

Oznaka: 0098079

REGULACIJA TRANSKRIPCIJE U EUKARIOTA

TRANSCIPTIONAL REGULATION IN EUKARYOTES
Voditeljica projekta: dr. sc. Marija-Mary Sopta

Tel. ++385 1 4560 984   e-mail: [e-mail]

Suradnici
Branka Jeličić, znanstvena novakinja u suradničkom zvanju asistentice
Josipa Pešut, dipl. ing. biotehnologije, znanstvena novakinja u suradničkom zvanju asistentice
Marija-Mary Sopta, doktorica biol. znanosti, znanstvena suradnica

Program rada i rezultati na projektu:

Regulacija transkripcije jedan je od osnovnih bioloških procesa koji se odvijaju u stanicama i u kojem su geni regulirani signalima iz same stanice ali i onima iz njene okoline. Na taj način stanica se prilagođava uvjetima u i oko nje. Velik broj faktora koji sudjeluju u transkripciji konzervirani su od kvasca do čovjeka pa se korištenjem modelnog organizma Saccharomyces cerevisiae (pekarski kvasac) može doći do saznanja koja vrijede za sve eukariotske stanice. Istraživanje našeg laboratorija usredotočeno je na kvaščev transkripcijski aktivator Gal4 i mehanizme kroz koje taj protein aktivira Gal4 ovisne gene. Naši rezultati pokazuju da je transkripcija gena koji su aktivirani Gal4 proteinom povećana u stanicama koji imaju nefunkcionalne mitohondrije. Povišena razina transkripcije posljedica je povećanog vezanja Gal4 na ciljnu DNA sekvencu. Buduća istraživanja obuhvaćala bi potragu za staničnim faktorima koji sudjeluju u prijenosu signala od mitohondrija do Gal4.

Research programme and results:

Transcriptional regulation is the principal mechanism by which gene expression is regulated in response to environmental and developmental cues. In general this regulation is performed by activators and/or repressors that bind to elements upstream of protein coding genes. Since the transcriptional machinery is conserved from yeast to mammals we use the bakers yeast Saccharomyces cerevisiae to study transcriptional regulation in an attempt to understand the fundamental mechanisms underlying this process. We have been studying transcriptional regulation by the yeast transcriptional activator Gal4, in particular its response to mitochondrial dysfunction.  We have shown that in response to mitochondrial dysfunction Gal4 dependent transcription of target genes is increased, and this increase appears to be mediated by an increase in Gal4 DNA binding activity. Future studies should enable us to define the effectors of this mitochondrial dependent signalling pathway and its interaction with the Gal4 protein.

---

Oznaka: 0098080

DINAMIKA I GENETIKA BIOAKTIVNIH MOLEKULA

DYNAMICS AND GENETICS OF BIOACTIVE MOLECULES
Voditelj projekta: dr. sc. Volker Magnus

Tel. ++385 1 4561 143   e-mail: [e-mail]

Suradnici
Branimir Klaić, doktor biol. znanosti, znanstveni savjetnik
Volker Magnus, doktor biol. znanosti, znanstveni savjetnik
Branka Salopek Sondi, doktorica biol. znanosti, znanstvena suradnica
Ana Tomašić, dipl. ing. kemije, znanstvena novakinja u suradničkom zvanju asistentice

Tehnički suradnici
Željko Marinić, magistar kem. znanosti
Vladimir Vraneša

Program rada i rezultati na projektu:

Cilj rada na projektu je upoznavanje molekularne osnove biološke aktivnosti. Glavni rezultati postignuti su na ovim područjima:

- fiziologija, biokemija i kemija biljnih hormona

- biokemija proteina

Na području biljnih hormona zaokružili smo višegodišnji projekt o pripravi derivata indoloctene kiseline (IAA) koji se mogu vezati na makromolekularne nosače, a da se sačuvaju strukturni elementi koji definiraju ligande kao auksine. Proteinski konjugati pripremljeni s takvim derivatima upotrebljavali smo za pripravu antitijela specifičnih za IAA. Također smo se povezali s grupom inozemnih kolega u potrazi za neinvazivnim elektrokemijskim metodama prikladnim za primjenu u analizi auksina. Praktično iskustvo u fiziologiji biljnog razvoja primjenjujemo u ugovorenoj suradnji s "Centrom za brdsko-planinsku poljoprivredu" o "Vegetativnom razmnožavanju američke borovnice Vaccinium corymbosum L." Također nastavljamo prijašnja istraživanja o ulozi  fitohormona u fiziologiji cvjetanja, pri čemu se bijeli kukurijek (Helleborus niger L.) pokazao naročito zanimljivim eksperimentalnim modelom. Naš dugoročni cilj na području biokemije proteina je karakterizacija enzima biogeneze i metabolizma biljnih hormona. Dosta smo vremena utrošili na orijentacijske eksperimente usmjerene u tom pravcu, no, definirane rezultate zasad smo dobili samo u usputnom projektu o utjecaju biljnih proteina na kristalnu modifikaciju kalcijeva karbonata koji se izlučuje iz zasićenih otopina.

Research programme and results:

The project addresses the molecular base of biological activity. In the report period, we focused on the following subjects:

- physiology, biochemistry and chemistry of plant hormones

- protein biochemistry

In the area of plant hormones, we completed a long-term project on the preparation of indoleacetic acid (IAA) derivatives which may be linked to macromolecular carriers without interfering with the structural elements which define the ligands as auxins. Protein conjugates prepared using such derivatives elicited the production of IAA-specific antibodies. We also teamed up with a group of foreign colleagues, in a search for non-invasive electrochemical methods of auxin analysis. Our practical experience in the physiology of plant development is being used in a research contract with the "Center for Agriculture in Mountainous Regions" on the  "Vegetative propagation of the American blueberry, Vaccinium corymbosum L. ". We are also continuing previous research on the role of plant hormones in the physiology of flowering using the Christmas rose (Helleborus niger L.) as a particularly interesting experimental model. Our long-term goal in the area of protein biochemistry is the characterization of enzymes involved in plant hormone physiology. While an appreciable amount of time was spent on orientational experiments in this direction, definite results were so far only obtained in a side-project on the template effect of plant proteins on the crystal modification of calcium carbonate precipitating from saturated solutions.