| DENİZCİ Esra Fatma ,
Danışman : Prof. Dr. GülşenTİMUR
Anabilim Dalı : Su Ürünleri Yetiştiriciliği
Programı (Varsa) : Yetiştiricilik
Mezuniyet Yılı : 2007
Tez Savunma Jürisi : Prof. Dr. Gülşen TİMUR (Danışman)
Prof. Dr. Akın CANDAN
Doç. Dr. Süheyla KARATAŞ
Yrd.Doç. Dr. Tülay AKAYLI
Yrd.Doç. Dr. Gülrüh ALBAYRAK
Tatlısu Balıklarında Hemorajik Septisemiye Neden Olan Aeromonas Hydrophila‘Nın 16s Rdna Rflp Ve Rapd Analizleri İle İdentifikasyonu
Bu çalışma, tatlısu balıklarında hemorajik septisemiye neden olan Aeromonas hydrophila’nın teşhisinde kullanılan ve fazla zaman alıcı klasik bakteriyolojik teşhis yöntemleri yerine, hızlı ve duyarlı olan moleküler teşhis metotlarından 16S rDNA restriksiyon fragment uzunluk polimorfizm (RFLP) ve rastgele çoğaltılmış polimorfik DNA (RAPD) analizlerinin kullanılması ve bu suretle hastalığın çok daha kısa bir sürede teşhis edilebilmesi amacı ile yürütülmüştür.
Bu amaçla, gökkuşağı alabalığından ve çeşitli akvaryum balıklarından izole edilen 12 adet Aeromonas hydrophila suşunun önce konvensiyonel bakteriyolojik yöntemler ile identifikasyonu yapılmıştır. İncelenen balıklarda vücudun yan yüzeylerinde, ağız içinde, yüzgeç diplerinde hemoraji, vücut üzerinde ülseratif hemorajik lezyonlar, solungaçlarda solgunluk, viseral organlarda hemoraji ve dalakta hipertrofi gibi hareketli aeromonad septisemiye özgü klinik ve otopsi bulguları gözlenmiştir.
Daha sonra, yurt dışından getirilen referans suş ve izole edilen Aeromonas hydrophila suşlarından Roche DNA izolasyon kiti kullanılarak DNA izole edilmiştir. 16S rDNA RFLP (Restriksiyon Fragment Uzunluk Polimorfizm) analizi için özgün primerler kullanılarak öncelikle PCR reaksiyonu gerçekleştirilmiştir. DNA’nın restriksiyon endonükleazları ile kesimi için; elde edilen amplifikasyon ürünleri üzerine AluI ve MboI restriksiyon endonükleazları eklenerek 37°C‘de 3 saat inkübe edilmiştir. Aeromonas hydrophila suşlarının RAPD (Rastgele Çoğaltılmış Polimorfik DNA) analizi 3 farklı primer kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Restriksiyon enzim reaksiyon karışımı ve RAPD çoğaltım ürünleri %2,5’lük agaroz jel elektroforezinde yürütülmüştür. Elektroforez sonrasında, agaroz jel etidyum bromür ile boyanarak UV transilluminator altında incelenmiştir.
Bütün suşların aynı RFLP profilleri gösterdiği tespit edilerek, suşlar Aeromonas hydrophila olarak identifiye edilmiştir. Aeromonas hydrophila suşlarının RAPD profilleri ise suşlar arasında farklılık göstermiştir. Bu bulgular Aeromonas hydrophila suşları arasındaki genetik çeşitliliği ortaya çıkarmıştır.
Dostları ilə paylaş: | 
