12
böyük əhəmiyyəti olmuşdur.
Hüceyrədaxili mayenin və hüceyrə orqanoidlərinin tərkibinin biokimyəvi
analizi zamanı xüsusi hazırlıq tədbirləri tələb olunur. Çünki, hüceyrələr və
hüceyrə orqanoidləri membran vasitəsilə əhatə edildiyindən, onların daxili
mühitindəki maddələr analiz üçün qabaqcadan azad edilməlidir. Hüceyrə
membranları müxtəlif kimyəvi birləşmələri müxtəlif sürətlə keçirir; bəzi
maddələr isə ümumiyyətlə membranlardan keçə bilmir (bunlara ilk növbədə
hidrofob xassəli maddələr aiddir). Buna görə, hüceyrədaxili mühitdə olan
maddələri ayırmaq üçün toxumaları doğrayıb xırda hissəciklər şəklinə saldıq-
dan sonra müəyyən tərkibli maye ilə qarışdırıb, homogen kütlə halına düşənə
qədər əzirlər. Bu proses
homogenizasiya
adlanır. Homogenizasiya etmək
məqsədilə çox vaxt Potter homogenizatorundan istifadə edilir. Bu cihaz dibi
sferik şəkildə olan qalın divarlı sınaq şüşəsindən və onun daxili diametrinə
uyğun gələn porşendən ibarətdir. Porşen xüsusi elektrik mühərriki vasitəsilə öz
oxu ətrafında fırladılır; içərisində toxuma kəsikləri olan sınaq şüşəsi yuxarı və
aşağı hərəkət etdirilir. Bu zaman tədricən toxuma kəsikləri əzilir, hüceyrələr
parçalanıb dağılır, hüceyrə orqanoidləri isə tamlığını saxlayır. Bu üsulla əldə
edilən homogenat bioloji fəallığını saxlayır.
Homogenləşdirmə zamanı istifadə edilən mayenin tərkibi elə olmalıdır ki,
tədqiq ediləcək maddənin tərkibinin və bioloji fəallığının dəyişməsinə səbəb
olmasın. Təsvir edilən üsulla əldə edilən homogenat sentrifuqalaşdırma yolu ilə
fraksiyalara ayrılır. Bu zaman sentrifuqanın üst hissəsində sitozol mayesi, aşağı
təbəqədə isə hüceyrə orqanoidləri toplanır. Sitozol fermentləri və digər bioloji
molekullar maye təbəqənin tərkibində tədqiq edilir. Bu maye müvafiq orqan və
ya toxumanın ekstraktı adlanır.
Biokimyəvi tədqiqatda hər hansı bir hüceyrə orqanoidinin öyrənilməsi
nəzərdə tutulduqda həmin orqanoid mümkün qədər təmiz halda əldə edil-
məlidir. Bu məqsədlə orqan və toxuma homogenatını sentrifuqadan keçir-
dikdən sonra, alınan çöküntünü fraksiyalara ayırırlar.
Hüceyrə orqanoidlərini fraksiyalara ayırmaq üçün
homogenizasiya
,
ekstraksiya
və
sentrifuqalaşdırma
proseslərindən istifadə edilir.
Orqanoidlərin ekstraksiyası
elə şəraitdə aparılmalıdır ki, onlar zədələn
-
məsin. Buna görə, ekstraksiya prosesi yüksək temperatur şəraitində aparılma-
malı, bundan ötrü istifadə edilən məhlulun pH-ı və osmos təzyiqi isə hücey-
rədaxili mühitin eyni göstəricilərinə bərabər olmalıdır. Çox vaxt tədqiq
ediləcək fermentlərin fəallığını mühafizə etmək məqsədilə, ekstraksiya prosesi
0-4
o
C temperaturda həyata keçirilir. Orqanoidlərin ekstraksiyası üçün çox
istifadə edilən məhlullardan birinin tərkibinə fizioloji qatılıqlara müvafiq gələn
miqdarda kalium və maqnezium ionları ilə birlikdə 0,25 M saxaroza daxildir;
bu məhlulun pH-ı 0,5 M qatılıqlı xlorid turşulu tris-bufer (tris-hidroksimetil-
aminometanhidroxlorid) məhlulu əlavə edilməklə, 7,4-ə çatdırılır; bundan
fərqli olaraq, lipidlərin ekstraksiyası üçün üzvi həlledicilərdən istifadə edilir.
Bu məhlullarla qarışdırıldıqdan sonra homogenizasiya edilən toxuma kütləsi
ilk dəfə aşağı sürətlə sentrifuqalaşdırılır; alınan çöküntüdən
Dostları ilə paylaş: