132
feniltiohidantoin-aminturşu
(FTH-AT)
Zülalların tərkibində amin qrupu sərbəst şəkildə olan aminturşunu
fenilizotiosianatın təsirinə uğratdıqdan sonra fenilhidantoin törəməsi şəklində
ayırıb, həmin aminturşunun növünü müəyyənləşdirmək mümkündür. Bu üsul
zülal molekulunun uc hissəsində olan aminturşu qalığının
növünü
aydınlaşdırmağa imkan verir və bu təyinat zamanı zülalın digər hissələrini
hidrolizə uğratmağa ehtiyac qalmır.
Ninhidrinlə reaksiya (Ruemann reaksiyası).
Aminturşuların vəsfi və
miqdari analizi üçün onların ninhidrinlə reaksiyasından geniş istifadə edilir.
Reaksiyanın birinci mərhələsində aminturşular oksidləşməklə dezaminləşmə
reaksiyasına uğrayır
və karboksil qrupunu itirir, ninhidrin isə reduksiyaya
məruz qalır.
İkinci mərhələdə ninhidrinin 1 molekul oksidləşmiş və 1 molekul reduksi-
yaya uğramış forması aminturşudan ayrılan ammonyakla reaksiyaya girərək,
məhlula göy-bənövşəyi rəng verən Ruemann purpuruna çevrilir. Bu zaman
məhlulun rənginin intensivliyi aminturşunun miqdarı
ilə mütənasib şəkildə
dəyişikliyə uğrayır (belə məhlul dalğa uzunluğu 580 nm olan işıq şüalarını
udur).
133
Prolin və oksiprolin (iminturşular)
-aminturşulardan fərqli olaraq,
ninhidrinlə reaksiya zamanı sarı rəngli boyaq maddəsi əmələ gətirir və bu
zaman ammonyak ayrılmır (bu boyaq maddəsinin məhlulu spektrofotometriya
zamanı dalğa uzunluğu 440 nm olan işıq şüalarını udur).
Ninhidrinlə aparılan reaksiya qeyri-spesifikdir. Amin qrupuna malik olan
bütün birləşmələr (o cümlədən zülallar) və ammonyak ninhidrinlə reaksiyaya
girir, lakin bu zaman karbon qazı əmələ gəlmir. Ninhidrin reaksiyası zamanı
karbon qazının
əmələ gəlməsi
-aminturşular üçün spesifikdir. Bu reaksiya
əsasında aminturşuların miqdari analizi üsulu hazırlanmışdır. Bundan ötrü,
aminturşuların kağız üzərində xromatoqrafiyasından və elektroforez üsulundan
istifadə edilir. Zülal hidrolizatı (aminturşu qarışığı) xüsusi iondəyişdirici qatran
(sulfopolistirol kationiti) hopdurulmuş kağız üzərində müxtəlif fraksiyalara
ayrılır. Neytral mühitdə aparılan elektroforez zamanı mənfi yüklü (turş xassəli)
aminturşular anoda, müsbət yüklü (qələvi xassəli)
aminturşular katoda doğru
hərəkət edir, neytral xassəli aminturşular isə yerini dəyişmir. Buna görə, adətən
neytral aminturşuları fraksiyalara ayırmaq üçün elektroforezi turş mühitdə
(pH=1,8-2,0)
aparırlar. Aminturşular fraksiyalara ayrıldıqdan sonra
elektroforez kağızı ninhidrin məhlulu ilə isladılır. Bunun nəticəsində hər bir
fraksiya intensivliyi aminturşunun miqdarından asılı olan göy-bənövşəyi rəngə
boyanır (prolin və oksiprolin fraksiyaları isə sarı rəng alır).
Hər bir fraksiya
ayrılıqda xüsusi məhlulla yuyulur və fotoelektrokalorimetr vasitəsilə həmin
məhlulun tərkibində olan aminturşuların miqdarı hesablanır.
Dostları ilə paylaş: