Instrucţiuni pentru testarea migrării aminelor aromatice primare de pe articolele de bucătărie din poliamide

Proceduri

2.3.1 Eşantioane (3% soluţie de migrare acid acetic)

Se transferă 4 ml de soluţie de migrare într-o fiolă gradată de 5 ml, se completează volumul cu 3% acid acetic. Se neutralizează soluţia adăugând 250 μl de hidroxid de amoniu şi de amestecă. Se filtrează un o porţiune pentru analiza LC-MS.
NOTĂ: Se verifică că pH-ul soluţiei neutralizate este bazic.

2.3.2 Condiţii HPLC

Volumul injecţiei: 50 μl temperatura coloanei: 22 °C

Faza mobilă A: 10 mM acetat amoniu Faza mobilă B: metanol

Debit: 0,6 ml/min Timp total operare: 60 min

Gradient (liniar):

Timp	% A	% B
0,0 min	95	5
0,8 min	95	5
2,5 min	75	25
42,0 min	33	67
44,0 min	95	5

Condiţii spectrometru de masă
Mod ion:	ESI+
Tensiune capilară (kV):	3
Temperatura sursă (°C):	120
Temperatură dizolvare (°C)	400
Debit gaz con (l/h)	50
Debit gaz dizolvare (l/h):	700
Rezoluţie HM 1 şi LM 1:	14
Rezoluţie HM 2 şi LM 2:	15
Energie ionică 1:	1,0
Intrare	1
Ieşire	2
Energie ionică 2:	0,5
Debit gaz coliziune	0,3
Multiplicator (V):	650

Parametrii MS/MS pentru PAA specifici:

PAA	Segment (min)	Cuantificare MRM Confirmare MRM	Staţionare (s)	Con (V)	Energie de coliziune (V)
m-PDA		108,9>91,9 108,9>64,8	0,2 0,2	20 20	15 15
2,6-TDA	0,0-7,9	123,0>107,9 123,0>105,9	0,2 0,2	20 20	18 18
2,4-TDA		123,0>107,9	0,2	20	18
		123,0>105,9	0,2	20	18
1,5 DAN		158,9>143,1	0,2	25	20
	8,0-13,9	158,9>114,8	0,2	25	20
ANL		93,8>76,9	0,2	20	18
		93,8>51,0	0,2	20	30
4,4'-DPE	14,0-18,5	201,2>107,8 201,2>184,0	0,2 0,2	20 20	20 20
4,4'-MDA	18,0 -24,5	199,1>105,8 199,1 >76,8	0,2 0,2	25 25	25 40
3,3'-DMB	24,6-30 0	213,2> 196,1	0,2 0,2	25	25
		213,2> 181,1		25	30

2.3.3 Calibrare HPLC

Calibrarea se realizează prin injectarea a 50 μl de soluţii de calibrare în LC/MS în condiţiile descrise. Datorită fazei de diluare incluse în prepararea eşantionului, soluţia standard reprezintă soluţiile de migrare cu o concentraţie de 1,25 ori mai mare (a se vedea tabelul). Pentru fiecare PAA se obţine o curbă de calibrare de regresie liniară trasând zonele de vârf ale cuantificării MRM în funcţie de valorile concentraţiei în μg/kg simulant (y = mx + b)
NOTĂ: stabilitatea sistemului trebuie verificată prin injectarea de câteva ori a soluţiei de calibrare până când se obţine o stabilitate a răspunsului.

NOTĂ: Curbele de calibrare trebuie să fie liniare: Cm = 100 x (Sm/m) ≤8%, iar coeficientul de corelare trebuie să fie de cel puţin 0,99. Diferenţele (%) trebuie să fie ≤20 pentru cele mai mici concentraţii şi ≤15% pentru alte concentraţii ale curbei de calibrare.

Sm = abaterea standard a pantei

m = panta

Stabilitatea răspunsului soluţiilor de calibrare trebuie verificate prin injectarea unei soluţii standard la fiecare 5-6 injecţii. Precizia din punct de vedere al CV% trebuie să fie de ≤ 15% pentru soluţiile standard de cele mai mici concentraţii şi ≤ 10% pentru celelalte soluţii standard

2.3.4 Cuantificarea nivelului de analit

Se injectează 50 μl din fiecare eşantion de soluţie de migrare preparat conform descrierii, în aceleaşi condiţii ca soluţiile de calibrare. Dacă urmează să fie injectată o serie de eşantioane, trebuie urmată o succesiune astfel încât să includă o soluţie de calibrare la fiecare 4-5 injecţii de eşantioane. Concentraţia fiecărei PAA din eşantion se calculează cu ajutorul curbelor standard externe de calibrare obţinute:
Migraţia specifică (μg/kg simulant) = (y - b ) / m
În cazul în care răspunsul eşantionului este mai mare decât cel al soluţiei standard cu cea mai mare concentraţie din curba de calibrare, se diluează soluţia de migrare cu 3% acid acetic la un nivel de concentraţie din domeniul de calibrare şi se neutralizează conform descrierii. Se reinjectează eşantionul diluat.

2.3.5 Confirmarea identităţii

Identitatea PAA este verificată astfel:
- Timpul de retenţie al analitului trebuie să fie acelaşi ca cel al celui mai apropiat standard de calibrare, cu o toleranţă de ± 5%

- Tranziţia de confirmare MRM: trebuie să se obţină detecţia unui răspuns de semnal pentru analitul din eşantion, corespunzător tranziţiei de confirmare. Raportul ionic (răspunsuri relative: cuantificare MRM / confirmare MRM) pentru PAA din eşantion nu trebuie să difere cu mai mult de 30% faţă de cel mai apropiat standard injectat cu o concentraţie similară.