Instrucţiuni pentru testarea migrării aminelor aromatice primare de pe articolele de bucătărie din poliamide

3 PROTOCOL C PRIN LC-MS

Metoda descrie procedura calitativă pentru confirmarea compoziţiei articolelor de bucătărie din nailon negru prin spectroscopia în infraroşu cu transformata Fourier (FT-IR) şi determinarea cantitativă ulterioară a migrării specifice a aminelor aromatice primare (PAA) articolele de bucătărie din nailon negru prin analiza extractelor de simulant alimentar apos (3% masă / volum acid acetic) prin ansamblul de cromatografie lichidă – spectrometrie de masă cu ionizare electrospray (UPLC-MS / MS). Această metodă a fost validată intern de NRL-IE. În scopul acestei metode, PAA sunt descrise ca acele substanţe care au aceiaşi timpi de retenţie şi aceleaşi caracteristici ale ionilor-mamă şi ionilor derivaţi (MS/MS) ca PAA standard utilizaţi pentru calibrare în condiţiile specificate.

3.1 Principiu

Metoda utilizată presupune fierberea articolelor de bucătărie din nailon negru (100°C) în 3% m/v acid acetic timp de 2 h, de trei ori pe o plită. Soluţia finală (extractul al treilea) este eşantionată şi analizată prin UPLC-MS / MS iar migrările specifice ale PAA sunt determinate prin raportarea rezultatelor la aria suprafeţei articolelor analizate. Metoda utilizată nu implică pretratarea extractelor iar analiţii urmăriţi sunt analizaţi cromatografic cu ajutorul unei coloane analitice Acquity BEH C₁₈ 1,7 μm. Spectrometria de masă cu ionizare pozitivă electrospray (ESI+) este utilizată pentru cuantificarea şi confirmarea ionilor-mamă [M+H]⁺ şi a fragmentelor pentru fiecare analit vizat.
Înainte de desfăşurarea testelor specifice de migrare se obţine un spectru FT-IR al articolului şi se compară cu un model standard pentru a se asigura conformitatea articolului pentru test.

3.2 Materiale şi Substanţe Chimice

3.2.1 Analiţi şi substanţe chimice

3.2.1 .1 Apă (UPW) (calitate HPLC).

3.2.1 .2 Acid acetic pur

3.2.1 .3 Soluţie acid acetic 3% m/v

3.2.1 .4 Bile antiproiecţie

3.2.1 .5 Metanol (MeOH), (calitate HPLC).

3.2.1 .6 Acid pentafluoropropionic (PFPA),

3.2.1 .7 UPLC faza mobilă A: 4,7 mM PFPA în metanol

3.2.1 .8 UPLC faza mobilă B: 4,7 mM PFPA în UPW

3.2.1 .9 Alcool pur dublu rafinat

3.2.1 .10 2,4-Toluendiamină (2,4-TDA)

3.2.1 .11 2,6- Toluendiamină (2,6-TDA)

3.2.1 .12 Anilină (ANL)

3.2.1 .13 4,4'-Metilendianilină (4,4'-MDA)

3.2.1 .14 o-Toluidină (o-T)

3.2.1 .15 3,3'-Dimetilbenzidină (3,3'-DMB)

3.2.2 Soluţii

1. 
   Soluţie mixtă standard de stoc (1.000 μq/ml).
   

Pentru prepararea a 1.000 μg/ml de soluţie standard de stoc, se cântăreşte cu rotunjire la 0,001 g, 50 mg din fiecare PAA într-o fiolă gradată de 50 ml şi se completează până la marcaj cu DRAA. Această soluţie este stabilă timp de un an depozitată la 2-8 °C.

2. 
   Soluţie mixtă standard intermediară de stoc (10 μq/ml).
   

Se prepară o soluţie standard de stoc descrisă mai sus diluată 1/100 în 3% soluţie acid acetic pentru a se obţine o soluţie intermediară ce conţine 10 μg/ml) din fiecare analit. Această soluţie este stabilă timp de o lună depozitată la 2-8 °C.

3. 
   Soluţie mixtă standard de stoc de lucru (100 μq/l).
   

Se prepară o soluţie standard intermediară de stoc descrisă mai sus diluată 1/100 în 3% soluţie acid acetic pentru a se obţine o soluţie de lucru ce conţine 100 μg/ml) din fiecare analit. Această soluţie este stabilă timp de o lună depozitată la 2-8 °C.
3.2.2.4 Standarde de lucru (25, 20, 10, 5, 2,5, 1,0 şi 0,5 μq/l).

Se prepară versiuni diluate ale soluţiei standard mixte de stoc de lucru descrise mai sus în 3% soluţie acid acetic pentru a se obţine curba standard de lucru a concentraţiilor de mai sus. Se depozitează soluţia la 2-8 °C. Această soluţie se prepară în ziua analizei.

3.2.3 Aparatură

1. 
   Sistem UPLC cu detector de spectrometrie de masă.
   
2. 
   Cilindre necalibrate gradate clasa A de 25, 100, 500 şi 1.000 ml.
   
3. 
   Balanţe calibrate cu o precizie de 0,01 g şi 0,1 mg.
   
4. 
   Cronometru electronic calibrat.
   
5. 
   Sondă de temperatură calibrată,
   
6. 
   Plită
   
7. 
   Pahar de sticlă 2 I x3 (înalt).
   
8. 
   Folie aluminiu.
   
9. 
   Stand retortă şi bosaje x 3.
   
10. 
    Pipete calibrate (200±0,4 μl volum fix; 1.000±0,3 μI volum fix).
    
11. 
    Fiole gradate - 50/100/1.000
    
12. 
    Dozator automat
    
13. 
    Sticle 500 şi 1.000 ml
    
14. 
    Sticlărie şi aparatură obişnuită de laborator.
    

3. Procedură

3.3.1 Analiza eşantioanelor de test.

Eşantioanele sunt injectate direct în UPLC-MS / MS.
Notă: În cazul în care un eşantion Individual depăşeşte domeniul curbei de calibrare, se pot face diluări corespunzătoare utilizând 3% soluţie acid acetic (3.2.1.3) iar eşantionul diluat va fi reinjectat. După analiză, rezultatele sunt înregistrate şi se calculează migrarea specifică conform descrierii de mai jos.

3.3.2 Condiţii HPLC

Se setează sistemul UPLC conform condiţiilor descrise în Anexă şi spectrometrul de masă conform condiţiilor descrise în Anexă. A se vedea cromatograma de eşantion prezentată în Anexă.
Nota 1: Se condiţionează coloana UPLC timp de 30 min. cu faza mobilă A (3.2.1.7) înainte de începerea unui test.
Nota 2: Se vor curăţa capul şi conul spectrometrului de masă înainte de desfăşurarea fiecărui test pentru a se asigura performanţe optime. A se vedea SOP PALCS 0047 sau respectiv SOP PALCS 0073 pentru curăţarea capului şi conului spectrometrului de masă.
Se injectează porţiunea specificată din soluţiile standard de lucru şi din soluţia de eşantion în coloană. Se asigură un coeficient de corelare al curbei de calibrare (R²) de cel puţin 0.995. Pentru fiecare PAA se acceptă un indice de corelare R²≥0.995. În cazul în care coeficientul de corelare R²<0.995 pentru oricare PAA, se va efectua o nouă calibrare injectând din nou soluţia standard sau preparând un nou set de soluţii standard.

3.3.3 Cuantificarea nivelului analitului

Se efectuează calibrarea standard. Ionii derivaţi monitorizaţi pentru fiecare PAA sunt prezentaţi mai jos:

PAA	Tranziţii monitorizate
2,4-TDA	122,9 → 108,0 and 122,9 → 106,0
2,6-TDA	122,9 → 108,1 and 122,9 → 106,0
ANL	94,0 → 76,8 and 94,0 → 51,1
4,4'-MDA	198,7 → 105,7 and 198,7 → 77,0
o-T	107,9 → 91,1 and 107,9 → 65,2
3,3'-DMB	211,6 → 196,4 and 211,6 → 180,6

Notă: se utilizează prima tranziţie ionică pentru cuantificarea tuturor PAA cu excepţia 2,4-TDA unde se va utiliza a doua tranziţie.

Calculul migrării specifice a PAA individuale
Concentraţia (C) de PAA vizată în eşantionul de test este dată de:

Unde μg/l PAA este valoarea obţinută din cromatograma aminei individuale;

v reprezintă volumul simulantului în I din etapă;

A reprezintă aria suprafeţei în dm² pentru articolul testat şi calculat din etapă.

Pentru eşantioanele recepţionate sub formă de soluţii de 3% acid acetic (de ex. Eşantioane test competenţă FAPAS) concentraţia (C) a PAA vizată în eşantionul de test este dată de:

Unde μg/l PAA este valoarea obţinută din cromatograma aminei individuale şi

d reprezintă densitatea soluţiei de eşantion.

Rezultatele sunt exprimate în μg/dm² rotunjit la 0.1 μg/dm².
Se calculează incertitudinea de măsurare (MU) pentru parametrii de test. Pentru PAA individuale sunt date următoarele valori:

PAA	MU (%)
2,4-TDA	0,058
2,6-TDA	0,089
ANL	0,037
4,4'-MDA	0,060
o-T	0,035
3,3-DMB	0,097

Se va asigura conformitatea cu toate legile privind incertitudinea măsurătorilor ce se por aplica parametrilor specifici de test.

Dacă incertitudinea de măsurare se aplică rezultatului analitic, atunci aceasta trebuie raportată în următorul format:
Rezultat 100±10*
* incertitudinea de măsurare raportată este incertitudinea de măsurare extinsă calculată cu ajutorul unui factor de acoperire de 2 care asigură un nivel de siguranţă de aproximativ 95%.