Ar bazine mohammed Doctorat d’Etat

Résumé :

L’objectif principal de cette étude consiste d’une part ; à mettre en évidence les dyslipidémies chez le diabétique de type 2 et l’impact de l’association diabète-dyslipidémie sur les autres fonctions de l’organisme, d’autre part ; explorer les vertus de la coriandre dans la thérapie de ces pathologies. Pour y aboutir, j’avais recours à deux axes d’investigation :

Le premier axe consacré à l’étude des dyslipidémies et pathologies associées chez une population de patients diabétiques en comparaison avec un groupe normal via :

• Un questionnaire informatif sur le mode de vie des patients et l’histoire de la maladie

• L’exploration des marqueurs biologiques du diabète et de la dyslipidémie : glycémie, cholestérol Total, HDL, LDL, Triglycérides, HTA et l’évaluation du risque coronarien.

Le deuxième axe consistait à étudier les effets du Coriandrum sativum utilisé dans les mêmes conditions rapportées par les gens sur :

• les rats Mérione shawi diabétiques pour mettre en évidence les effets éventuels sur le diabète et les pathologies associées, en administrant le décocté de la plante par voie orale de manière aigue à la dose de 20 mg/kg PC et sub-chronique aux doses 20, 200 et 400 mg/kg PC Les résultats sont comparées à ceux de l’antidiabétique de référence (Glibenclamide) et à ceux des témoins n’ayant reçu que de l’eau distillée comme placébo.

• Les rats Wistar normaux pour mettre en évidence l’effet diurétique de la plante. Les résultats sont comparées à ceux du diurétique de référence (Furosémide) et à ceux du témoin n’ayant reçu que de l’eau distillée comme placébo.

Mots clés : DNID, Rat Mérione shawi, rats Wistar, Coriandrum sativum (CS), glycémie, cholestérol total (CT), Triglycérides (TG), HDLc, LDLc, HTA.

Dyslipidemia and pathologies associated with the type 2 diabetic. Exploration of Coriandrum sativum on an animal model of type 2 diabetes: Rat Merione shawi

Abstract :

The main objective of this study is on the one hand; to highlight the dyslipidemia in type 2 diabetic and the impact of the association diabetes-Dyslipidemia on the other functions of the Organization, on the other hand; explore the virtues of cilantro in the treatment of these pathologies. To reach there, I had recourse to two areas of investigation: the first axis devoted to the study of dyslipidemia and pathologies associated with a population of diabetic patients compared to a normal group via:

An informative questionnaire on the mode of life of patients and the history of the disease

The exploration of biological markers of diabetes and Dyslipidemia: blood glucose, Total, HDL, LDL cholesterol, triglycerides, HTA and coronary risk assessment.

The second axis was to study the effects of Coriandrum sativum used under the same conditions reported by people on:

Merione shawi diabetic rats to highlight the potential effects on diabetes and associated pathologies by administering the plant so acute oral dose of 20 mg/kg PC and sub-chronique at doses 20, 200, and 400 mg/kg bw results are compared to those of the reference (Glybenclamid) anti-diabetic and those of the witnesses having received water distilled as a placebo.

Wistar rats normal, to highlight the diuretic effect of the plant. The results are compared to those of the reference (furosemide) diuretic and those of the witness having received water distilled as a placebo.

Key Words :

NIDDM, Merione Shawi Rat, Wistar rats, Coriandrum Sativum (CS), Glucose, Total Cholesterol (TC), triglycerides (TG), HDLc, LDLc, HTA.

Etude de la production de l’Ochratoxine (OTA) par des souches d’Aspergillus isolées à partir du raisin marocain en vue de la maîtrise du risque mycotoxique




Par

SELOUANE Atar

Champs Disciplinaire : Biologie / Biochimie et Sciences Alimentaires

UFR : Biochimie et Sciences Alimentaires.

Soutenu le : 14/07/2011
Membres de jury : 

Ahmed LEBRIHI, Président	Université Moulay Ismail, Meknès
Amina BOUSTA, Encadrant	Faculté des Sciences Dhar El Mahraz, Fès
Ahmed ELAMRANI, Rapporteur	Faculté des Sciences, Oujda.
Khalid TAWFIKUI HAJJI, Rapporteur	Faculté des Sciences Dhar El Mahraz, Fès
Driss BOUYA, Membre	Faculté des Sciences Dhar El Mahraz, Fès
Rajae BELKHOU , Membre	Ecole Supérieure de Technologie, Fès

Résumé :

La contamination des produits agro-alimentaires par les mycotoxines telles que l'ochratoxine A (OTA) est une préoccupation majeure pour la santé humaine et animale. L'ochratoxine A (OTA) est un métabolite secondaire de certaines espèces des genres Aspergillus et Penicillium. L’OTA a des propriétés néphrotoxiques et cancérogènes. Elle a été fréquemment trouvée dans de nombreuses denrées alimentaires, y compris les raisins et les produits dérivés. L'Agence internationale de recherche sur le cancer (AIRC) a classé l'OTA dans le groupe 2B comme un composé cancérogène possible pour l'homme et les limites de 2 μg/kg dans le jus de raisin et de 10 µg/kg dans les raisins secs ont été introduites par l'Union Européenne.

Ce travail présente les résultats de l’étude de la production de l’OTA et d’autres métabolites secondaires par certaines espèces d’Aspergillus isolées à partir du raisin marocain. La présence de champignons producteurs d'ochratoxine A (OTA) dans le raisin marocain a été étudiée pour la première fois. Des échantillons de raisins frais (à maturité) et de raisins secs ont été collectés. L’analyse mycologique des différents échantillons, en tenant compte uniquement des genres susceptibles de produire l’OTA (Aspergillus et Penicillium), a montré que les 391 souches isolées appartiennent au genre Aspergillus (360 isolats à partir du raisin frais et 31 isolats à partir des raisins secs). Trois isolats du genre Penicillium ont été détectés uniquement dans les raisins secs. Dans les raisins frais, les aspergilli noirs (A. niger aggregate, A. carbonarius et A. japonicus) représentent 98.3% de tous les isolats. En général, la prépondérance des aspergilli de la section Nigri a été constatée durant les trois années avec une prédominance des espèces du groupe A. niger aggregate (82.5%). Tous les isolats ont été testés pour leur capacité à produire l'OTA sur le milieu CYA. Tous les isolats d’A. carbonarius (12 isolats) et 42.8% des isolats d’A. Niger étaient capables de produire l’OTA. Les échantillons (n ​​= 22) collectés en 2006 ont été analysés pour leur teneur en OTA. La plupart des échantillons contenaient cette mycotoxine à des niveaux variant entre 0.08 et 4.0 µg/kg. Le pourcentage des isolats producteurs d’OTA appartenant aux espèces A. niger aggregate en 2005-2006 (42-47%) est beaucoup plus élevé que celui rapporté par la littérature (5-30%). Les effets du milieu de culture (YES, CYA, SNM), de la température (10, 15, 20, 25, 30 et 37°C), du temps d'incubation (5, 10, 15 et 20 jours) et de leurs interactions sur la croissance fongique et la production de l'ochratoxine A a été étudié. Ainsi, 12 isolats ont été sélectionnés pour cette étude et leur identification moléculaire a montré que six souches appartiennent à l’espèce A. tubingensis, deux à l’espèce Aspergillus niger et quatre sont des A. carbonarius. L’augmentation de la température induit une augmentation du taux de croissance des espèces du groupe A. niger aggregate sur les trois milieux de culture testés et les températures optimales de croissance sont 30-37°C sur le milieu CYA et 37°C sur les milieux YES et SNM. En ce qui concerne l’espèce A. carbonarius, l’augmentation de la température favorise la croissance sur les milieux CYA et YES avec des températures optimales de 30-37°C. Sur le milieu SNM, le taux de croissance maximum a été obtenu à 30°C. Le milieu SNM favorise la synthèse de l’OTA à 25°C aux différents temps d’incubation et à 20°C après 20 jours d’incubation. Sur les milieux YES et CYA, les conditions optimales de production de cette toxine sont une température de 25°C et un temps d’incubation de 10 jours. En général, les milieux YES et CYA favorisent la croissance fongique alors que le milieu SNM stimule la production de l’OTA dans la plupart des conditions étudiées. Les effets de l’activité de l'eau (aw : 0.90, 0.95 et 0.99), de la température, du temps d’incubation et leurs interactions sur la croissance fongique et la production de l’OTA ont été étudiés sur le milieu SNM. Les conditions optimales de croissance de la plupart des souches étudiées ont été obtenues à 25°C et à 0.95 a_w. Aucune croissance fongique n’a été observée à 10°C, quelle que soit l'activité de l'eau et les isolats testés. Les températures optimales de production de l’OTA sont 25-30°C pour A. carbonarius et 30-37°C pour A. niger aggregate. Les activités de l’eau optimales pour la production de l’OTA sont 0.95-0.99 pour A. carbonarius et 0.90-0.95 pour A. niger aggregate. Les productions maximales d’OTA ont été obtenues à 37°C/0.90 a_w pour les isolats du groupe A. niger aggregate (0.24 g/g gélose) et à 25°C/0.99 aw pour les isolats A. carbonarius (0.22  g/g). L’analyse statistique de la variance (ANOVA) a montré que l’activité de l’eau, la température, le temps d’incubation et les isolats influencent de manière significative (P< 0.0013) sur la croissance fongique et la production de l’OTA.

La production d’autres métabolites secondaires volatils et non volatils dans le but d’une part de différencier les espèces d’Aspergillus de la section Nigri (A. carbonarius, A. japonicus et les espèces du groupe A. niger aggregate) et d’autre part de faire un premier screening de certaines molécules d’intérêt a été évaluée. C’est ainsi que l’analyse des extraits de culture de 81 isolats d’Aspergillus de la section Nigri (A. niger aggregate, A. japonicus et A. niger) a été réalisée par HPLC-DAD. Les résultats ont montré que ces derniers produisent plus de 130 métabolites secondaires non volatils dont 25 ont été retenus pour l’analyse SPSS. Le classement des souches sur base de leur profil métabolique a montré qu’elles peuvent être divisées en trois groupes distincts. Nos résultats ont également montré que des souches d’A. niger, d’A. tubingensis et A. carbonarius synthétisent également plus d’une centaine de composés volatils. L’identification de ces composés a été réalisée par GC-MS et GC-FID-O. Certaines molécules sont produites par tous les isolats mais à des proportions variables alors que d’autres sont spécifiques à certaines souches. Ainsi, 3 isolats d’A. tubingensis et un isolat d’A. carbonarius produisent des terpènes dont la proportion varie selon les souches (35 à 93% de la surface totale des pics détectés). Ces résultats montrent d’ores et déjà qu’il est possible de se baser sur la fraction volatile pour la classification des champignons. L’identification préliminaire de ces métabolites secondaire a révélé la présence de molécules très intéressantes de par leurs propriétés biologiques comme les naphto--pyrones et les terpènes.

Les résultats de cette étude ont montré que les isolats d’Aspergillus du raisin marocain peuvent produire l’OTA dans une large gamme de température et d’activités de l’eau, ce qui peut présenter un risque pour le consommateur. La connaissance des conditions de croissance et de production de l’OTA peuvent contribuer à la maîtrise du risque sanitaire lié à cette toxine.

Mots clés :

Aspergillus niger;Aspergillus tubingensis, Aspergillus carbonarius,ochratoxine,activité de

l’eau.

STUDY OF THE PRODUCTION OF OCHRATOXIN (OTA) BY STRAINS OF ASPERGILLUS ISOLATED FROM MOROCCON GRAPES TO CONTROL RISK MYCOTOXIN
Abstract

Contamination of food and feed with mycotoxins such as ochratoxin A (OTA) is a major concern for human health. Ochratoxin A (OTA), is a secondary metabolite produced by several moulds of Aspergillus and Penicillium. OTA is a nephrotoxin and potential carcinogene and it has been commonly found in a number of diverse agroproducts, including grape and grape derivatives. The International Agency of Research on Cancer (IARC) has classified OTA in group 2B as a possible carcinogenic compound for humans. Limits of 2µg/kg in grape juice and 10 µg/kg in raisins have been introduced by European Union.

The occurrence of ochratoxin A (OTA) producing fungi in Moroccan grapes and raisins was studied for the first time. Samples of grapes (ripe berry) and raisins were collected. Fungi isolated from grapes and raisins were analysed and only isolates belonging to the genera Aspergillus and Penicillium were evaluated (Aspergillus: 360 isolates from grapes and 31 from raisins; Penicillium: 3 isolates from raisins). In grapes, the most abundant specie was member of Aspergillus niger aggregate (82.5%) whereas A. carbonarius isolates were detected occasionally and in small numbers (3.3%). All isolates were tested for their ability to produce OTA in CYA medium. OTA was detected in all culture of A. carbonarius (12 isolates) and 39% of A. niger aggregate isolates. Samples (n=22) collected in 2006 were analysed for their OTA content. Most of samples contained OTA at levels varying between 0.08 and 4.00 µg/kg.

The effects of culture media (YES, CYA, SNM), temperature (10, 15, 20, 25, 30 and 37 °C), incubation time (5, 10, 15 and 20 days) and their interactions on radial growth and OTA production of/by eight Aspergillus niger aggregate strains (six A. tubingensis and two A. niger) and four A. carbonarius were studied. In general, growth rate increased as temperature increased, regardless of the culture media and isolates. For A. niger aggregate isolates, optimal temperatures for growth were observed at 30-37 °C on CYA medium and 37 °C on YES and SNM media. For A. carbonarius isolates, the maximum growth rates were obtained at 30-37°C on YES and CYA media and at 30°C on SNM medium. SNM medium promotes the synthesis of OTA at 25 °C for A. niger aggregate and 25-30°C for A. carbonarius at different incubation times. On CYA and YES media, the optimum conditions for production of this toxin are a temperature of 25 °C and an incubation time of 10 days. Generally, YES and CYA media promote fungal growth, while the SNM medium stimulates the production of OTA in most studied conditions.

The effects of temperature, water activity (a_w), incubation time and their combinations on radial growth and ochratoxin A (OTA) production of/by Aspergillus niger aggregate strains and A. carbonarius on SNM medium were also studied. Optimal conditions for the growth of most studied strains were shown to be at 25°C and 0.95 a_w. No growth was observed at 10°C regardless of the water activity and isolates. The optimal temperature for OTA production was in the range of 25-30°C for A. carbonarius and 30-37°C for A. niger aggregate. The optimal a_w for toxin production was 0.95-0.99 for A. carbonarius and 0.90-0.95 for A. niger aggregate. Mean OTA concentration produced by all the isolates of A. niger aggregate tested at all sampling times shows that maximum amount of OTA (0.24 µg/g) was produced at 37°C and 0.90 a_w. However, for A. carbonarius, mean maximum amounts of OTA (0.22 µg/g) were observed at 25°C and 0.99 a_w. Analysis of variance showed that the effects of all single factors (culture media, a_w, isolate, temperature and incubation time) as well as two-, three and four way interactions had a high significant influence on the growth rates and OTA production of/by A. tubingensis, A. niger, and A. carbonarius.

The production of other volatile and non-volatile secondary metabolites was investigated, in order to differentiate species of Aspergillus section Nigri (A. carbonarius, A. japonicus and species of the A. niger aggregate) and to explore metabolites with interesting biological activities. Analysis of culture extracts of 81 isolates of Aspergillus section Nigri (A. niger aggregate, A. carbonarius and A. japonicus) was performed by HPLC-DAD. Isolates produce more than 130 non-volatile secondary metabolites of which 25 were selected for SPSS analysis. The classification of strains based on their metabolic profile showed that they can be divided into three distinct groups. Our results also showed that strains of A. niger, A. tubingensis and A. carbonarius also synthesize more than a hundred volatile compounds. The identification of these compounds was performed by GC-MS and GC-FID-O. Some metabolites are produced by all isolates but to varying degrees while others are specific to certain strains. Thus, three isolates of A. tubingensis and an isolate of A. carbonarius produce terpenes whose proportion varies among strains (35 to 93% of the total area of ​​peaks detected). Preliminary identification of these secondary metabolites revealed the presence of molecules with interesting biological properties such as naphtho- -pyrones and terpenes.

The results of this study showed that strains of Aspergillus isolated from Moroccan grapes can produce OTA in a wide range of temperatures and water activities, which represent a risk to the consumer. Knowledge of growing conditions and production of OTA can help control the health risk associated with this toxin.
Key Words :

Aspergillus niger;Aspergillus tubingensis, Aspergillus carbonarius,ochratoxin,water activity

intÉgration de l’environnement et de l’Éducation relative Àl’environnement

dans le systÈme Éducatif marocain :

cas de l’enseignement des sciences de la viet et de la terre
Par 

HAMOUCHI Aïssa

Champs Disciplinaire : Biologie / Didactique des Sciences

UFR : Environnement et Eau

Soutenu le : 22 Octobre 2011
Membres de jury : 

Abdelkrim ELHAJJAMI, Président	Ecole Normale Supérieure, Fès
Khadija ESSAFI, Encadrant	Faculté des Sciences Dhar El Mahraz, Fès
Abdellatif CHIADLI , Rapporteur	Faculté des Sciences de l’Education, Rabat
Saad BENAMAR, Rapporteur	Ecole Normale Supérieure, Fès
Fatiha KADDARI, Membre	Faculté des Sciences Dhar El Mahraz, Fès
Rachid JANATI IDRISSI, Membre	Ecole Normale Supérieure, Tétouan