FiZİko-kimyasal özelliklerin belirlenmesinde kullanilan yöntemler

Sonlanma Noktası Ölçümleri

39. 
    Opaklık korneadan geçen ışık miktarına göre belirlenir. Kornea opaklığının nicel ölçümü opaklık ölçer ile, sürekli ölçekte opaklık değerleri elde ederek gerçekleştirilir.
    

40. 
    Geçirgenlik bütün kornea hücre katmanlarından, yani kornea dış yüzeyi epitelinden ve kornea iç yüzeyi endotelinden geçen sodyum floresin boyasının miktarıyla belirlenir. 1 ml sodyum floresin çözeltisi (test sırasında sıvılar ve yüzey aktif maddeler için 4 veya yüzey aktif madde olmayan katı maddeler için 5 mg/ml) korneal tutucunun korneanın epitel tarafına gelen ön odacığına eklenir. Korneal tutucunun korneanın endotel tarafına gelen arka odacığına ise yeni EMEM doldurulur. Tutucu daha sonra 90 ± 5 dakika süreyle ve 32 ± 1 °C sıcaklıkta yatay olarak inkübeedilir. Arka odacığa geçen sodyum floresin miktarı UV/VIS spektrofotometresi yardımıyla ölçülür. Spektrofotometre ölçümleri 490 nm seviyede değerlendirilir ve sürekli ölçekte edinilmiş optik yoğunluk (OD490) veya soğurma değerleri olarak kaydedilir. Floresin geçirgenlik değerleri standart 1 cm yol uzunluğunda görünür ışık spektrofotometresinden elde edilen değerlerde OD490 değerleri kullanılarak elde edilir.
    

41. 
    Farklı bir yöntem olarak, (i) Plaka okuyucunun floresin OD490 değerlerini belirleyecek doğrusal aralık değerleri belirlenebilir olması (ii) 96 kuyu plakada (96 well microtitre plate) kullanılacak floresin numunelerinin hacmi standart 1 cm yol uzunluğuyla elde edilecek OD490 değerlerini karşılaması durumunda 96 kuyulu mikroplaka okuyucu da kullanılabilir(bu durumda tamamen dolu kuyu [genellikle 360 ml] gerekli olabilir).
    

VERİLER VE RAPORLAMA
Veri Değerlendirmesi

42. 
    Arka plan opaklığı ve negatif kontrol geçirgenlik OD490 değerleri için opaklık ve ortalama geçirgenlik (OD490) değerleri doğrulandığında her uygulama grubundaki ortalama opaklık ve geçirgenlik OD490 değerleri her bir grupta in vitrotahriş edicilik puanını (IVIS) hesaplamak için kullanılan aşağıdaki ampirik formülle birleştirilecektir.
    

IVIS = ortalama opaklık değeri + (15 x ortalama geçirgenlik OD490 değeri)

43. 
    Sina ve arkadaşları (16) bu formülün kurum içi ve laboratuvarlar arası çalışmalardan belirlendiğini ifade etmiştir. Çok laboratuvarlı bir çalışmada 36 bileşik için ortaya konan veriler in vivove in vitro veriler arasında en uygun denklemi belirlemek için çok değişkenli analize tabi tutulmuştur. Bu analiz iki ayrı şirketteki bilim adamları tarafından yapılmış, neredeyse özdeş denklemlere ulaşılmıştır.
    

44. 
    Opaklık ve geçirgenlik değerleri test materyalinin yol açtığı aşındırıcılık veya ciddi tahriş ediciliğin iki sonlanma noktasından sadece birinden mi gerçekleştiğini belirlemek için ayrıca bağımsız olarak değerlendirilmelidir (bkz. Karar Kriterleri).
    

Karar Kriterleri

45. 
    IVIS > 55,1 değerine yol açan maddeler aşındırıcı veya ciddi tahriş edici olarak kabul edilir. Paragraf 1’de belirtildiği üzere test materyali oküler aşındırıcı veya ciddi tahriş edici olarak tanımlanmazsa mevzuata göre sınıflandırma ve etiketlemeyapabilmek için ek testler gerekir. BCOP test yöntemi EPA (1), AB (2) veya GHS (3) sınıflandırma sistemlerine göre sınıflandırılmış toplamda % 79 (113/143) ila % 81 (119/147) kesinliğe sahip olup, in vivo tavşan gözü test yöntemi verileriyle karşılaştırıldığında hatalı pozitif oran % 19 (20/103) ila % 21 (22/103) ve hatalı negatif oran % 16 (7/43) ila % 25 (10/40) düzeyindedir. Belirli kimyasal (alkoller, ketonlar) veya fiziksel (katı maddeler) kategorilerden maddeler veritabanından çıkarıldığında AB, EPA ve GHS sınıflandırma sistemlerine göre BCOP kesinliği % 87 (72/83) ila % 92 (78/85), hatalı pozitif oranlar % 12 (7/58) ila % 16 (9/56) ve hatalı negatif oranlar % 0 (0/27) ila % 12 (3/26) düzeyinde gerçekleşmektedir.
    

46. 
    Test materyalinin oküler aşındırıcı veya ciddi tahriş edici olarak sınıflandırılmaması durumunda dahi BCOP verileri in vivotavşan gözü testinden veya doğrulanmış bir in vitrotestten elde edilen verilerle birlikte BCOP test yönteminin ciddi olmayan tahriş ediciler ile tahriş edici olmayan maddelerin teşhisinde kullanışlılığı ve sınırlarının daha iyi değerlendirilmesine yardımcı olabilir.
    

Çalışma Kabul Kriterleri

47. 
    Pozitif kontrolün ortaya çıkardığı IVIS en az üç ayda bir veya testlerin düşük sıklıkla, yani ayda birden daha az yapıldığı hallerde laboratuvarlarda kabul edilebilir testin her yapılışından sonra güncellenecek tarihsel ortalamanın iki standart sapmasına denk düşüyorsa test kabul edilebilir sayılır. Negatif veya çözücü/taşıyıcı kontrol tepkileri negatif veya çözücü/taşıyıcı kontrol perspektifiyle işlemden geçirilmiş sığır korneaları için belirlenmiş arka planopaklık ve geçirgenlik değerlerinin üst sınırlarından daha düşük opaklık ve geçirgenlik değerleri ortaya koymalıdır.
    

Test Raporu

48. 
    Test raporu çalışmanın yürütülmesine göre aşağıdaki bilgileri içermelidir:
    

Test ve Kontrol Maddeleri

• 
  Kimyasal Kuramlar Servisi (Chemical Abstracts Service -CAS) tarafından kullanılan ad ve biliniyorsa, ardından diğer isimler,
  
• 
  Biliniyorsa CAS Numarası,
  
• 
  Biliniyorsa maddenin veya karışımın (ağırlık yüzdesi olarak) aralığı ve bileşimi,
  
• 
  Çalışmanın yürütülmesiyle ilgili olarak fiziksel durum, uçuculuk, pH, sabitlik, kimyasal kategori, su çözünürlüğü gibi fiziksel ve kimyasal özellikler,
  
• 
  Uygulanıyorsa, test/kontrol maddeleri üzerinde test öncesinde yapılan ısıtma, öğütme gibi işlemler,
  
• 
  Biliniyorsa sabitlik.
  

Sponsor ve Tesisle İlgili Bilgiler

• 
  Sponsorun, tesisin ve çalışma direktörünün adları ve adresleri,
  
• 
  Gözlerin alındığı kaynak (toplandıkları tesis),
  
• 
  Gözlerin depolanma ve taşınma koşulları (toplanma günü ve saati, teste başlamadan önce geçen süre, taşıma araçları ve sıcaklığı, kullanılan antibiyotikler gibi),
  
• 
  Biliniyorsa gözleri toplanan hayvanların özellikleri (donör hayvanın yaşı, cinsiyeti, ağırlığı gibi).
  

Test Yöntemi ve Protokolün Kullanılma Gerekçeleri

• 
  Test Yöntemi Bütünlüğü
  
• 
  Test yönteminin bütünlüğünü (kesinliğini ve güvenilirliğini) süreç boyunca korumaya yönelik işlemler (test yeterlilik referans maddelerinin periyodik testleri, geçmiş negatif ve pozitif kontrol verilerinin kullanılması gibi).
  

Testin Kabul Edilebilirlik Kriterleri

• 
  Geçmiş verilere dayanan kabul edilebilir eşzamanlı pozitif ve negatif kontrol aralıkları,
  
• 
  Uygulanabiliyorsa geçmiş verilere dayanan eşzamanlı referans kontrol aralıkları.
  

Test Koşulları

• 
  Kullanılan test sisteminin tanımlanması,
  
• 
  Kullanılan kornea tutucusunun türü,
  
• 
  Opaklık ölçücü ve spektrofotometre gibi opaklık ve geçirgenlik ölçen cihazların kalibrasyon bilgileri,
  
• 
  Kullanılan sığır kornealarının vasıfları ve diğer bilgiler,
  
• 
  Kullanılan test prosedürüne ilişkin bilgiler,
  
• 
  Kullanılan test materyali konsantrasyonu,
  
• 
  Test prosedüründe herhangi bir değişiklik yapılmışsa tanımlanması,
  
• 
  Modelin geçmiş verilerine (negatif ve pozitif kontroller, yeterlik maddeleri, referans maddeler gibi) atıflar,
  
• 
  Kullanılan değerlendirme kriterlerinin tanımlanması.
  

Sonuçlar

• 
  Tekil test numunelerinden gelen verilerin tablo haline getirilmesi (örneğin test maddesi, pozitif, negatif ve mevcutsa referans kontroller için opaklık ve OD₄₉₀ değerleri ile hesaplanan IVIS mevcutsa çoklu tekrar deneylerinden elde edilen verilerle birlikte tablo olarak belirtilir ve her tekil deneydeki ± standart sapmayı gösterir.),
  
• 
  Gözlemlenen diğer etkilerin tanımlanması.
  

Sonuçların Tartışılması.

Sonuç.

KAYNAKLAR

(1) U.S. EPA (1996). LabelReview Manual: 2nd Edition. EPA737-B-96-001. Washington, DC: U.S. Environmental Protection Agency.

(2) Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and of theCouncil of 16 December 2008 on classification, labelling and packaging of substances and mixtures, amending and repealing Directive 67/548/EEC and 1999/45/EC, andamendingRegulation (EC) No 1907/2006. OJ L 353, 31.12.2008, p. 1.

(3) UN (2007). Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS). Second revisededition, New York &Geneva: United Nations Publications, 2007. Available:[http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev02/02files_e.html]

(4) ESAC (2007). Statement on the conclusion of the ICCVAM retrospective study on organotypic in vitro assays as screening tests to identify potential ocular corrosives and severe eyeirritants. Available:[http://ecvam.jrc.it/index.htm]

(5) ICCVAM (2007). Test Method Evaluation Report –In Vitro OcularToxicity Test Methods for Identifying Ocular Severe Irritants and Corrosives. Interagency Coordinating Committee on theValidation of Alternative Methods (ICCVAM) and the National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). NIH Publication No: 07-4517. Available:

[http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/ocutox/ivocutox/ocu_tmer.htm]

(6) Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of theCouncil of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a A European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC andCommission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC. OJ L 396, 30.12.2006, p. 1.

(7) OECD (2002). Test Guideline 405. OECD Guideline for Testing of Chemicals. Acute eye irritation/corrosion. Available:

[http://www.oecd.org/document/40/0,2340,en_2649_34377_37051368_1_1_1_1,00.html]

(8) ICCVAM (2007). ICCVAM Recommended BCOP Test Method Protocol. In: ICCVAM Test Method Evaluation Report –In Vitro Ocular Toxicity Test Methods for Identifying Ocular Severe Irritants and Corrosives. Inter­agency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). NIH Publication No: 07-4517. Available:

[http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/ocutox/ivocutox/ocu_tmer.htm]

(9) ICCVAM. (2006). Current Status of In Vitro Test Methods for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants: Bovine Corneal Opacity and Permeability Test Method. NIH Publication No: 06-4512. ResearchTriangle Park: NationalToxicology Program. Available:

[http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/ocutox/ivocutox/ocu_brd_ice.htm]

(10) INVITTOX (1999). Protocol 124: Bovine Corneal Opacity and Permeability Assay – SOP of Microbiological Associates Ltd. Ispra, Italy: European Centre for theValidation of Alternative Methods (ECVAM).

(11) Gautheron, P.,Dukic, M., Alix, D. and Sina, J.F. (1992). Bovinecornealopacityandpermeability test: Anin vitroassay of ocularirritancy.Fundam. Appl. Toxicol.18:442-449.

(12) Siegel, J.D.,Rhinehart, E., Jackson, M., Chiarello, L., andthe Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee (2007). Guideline for Isolation Precautions: Preventing Transmission of Infectious Agents in Healthcare Settings. Available:

[http://www.cdc.gov/ncidod/dhqp/pdf].

(13) Maurer, J.K.,Parker, R.D. andJester, J.V. (2002). Extent of corneal injury as the mechanistic basis for ocular irritation: key findings and recommendations for the development of alternative assays.Reg. Tox. Pharmacol.36:106-117.

(14) Doughty, M.J.,Petrou, S. andMacmillan, H. (1995). Anatomy and morphology of the cornea of bovine eyes from a slaughterhouse.Can. J. Zool.73:2159-2165.

(15) Collee, J. andBradley, R. (1997). BSE: A decade on - Part I. TheLancet 349: 636-641.

(16) Sina, J.F.,Galer, D.M., Sussman, R.S., Gautheron, P.D., Sargent, E.V., Leong, B., Shah, P.V., Curren, R.D., and Miller, K. (1995). A collaborative evaluation of seven alternatives to the Draize ey eirritation test using pharmaceutica lintermediates. Fundam.Appl Toxicol26:20-31.

(17) ICCVAM (2006). Background review document, Current Status of In Vitro Test Methods for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants: Bovine Corneal Opacity and Permeability (BCOP) Test Method. Available:

[http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/ocutox/ivocutox/ocu_brd_bcop.htm]

(18) ICCVAM (2006). Background review document, Current Status of In Vitro Test Methods for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants: Isolated Chicken Eye (ICE) Test Method. Available:

[http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/ocutox/ivocutox/ocu_brd_bcop.htm]

Ek-I
TANIMLAR
Doğruluk: Test yöntemi sonuçları ile kabul edilen referans değerler arasındaki uyuşma düzeyi. Test yöntemi performansını ölçmek için kullanılır ve 'bağıntılılık' kavramının bir yönüdür. Bu terim sık sık 'uyuşma' kavramıyla karşılanarak test yönteminden kaynaklanan doğru sonuçlar anlamında kullanılır.

Referans madde: Test maddesi ile karşılaştırmada standart olarak kullanılan madde. Referans maddenin şu özellikleri taşıması gerekir: (i) Sürekli ve güvenilir kaynaklar, (ii) Test konusu maddeler sınıfıyla yapısal ve işlevsel benzerlik, (iii) Bilinen fiziksel/kimyasal özellikler, (iv) Bilinen etkiler hakkında destekleyici veriler ve (v) İstenen tepki aralığında bilinen kuvvet.

Kornea: Göz küresinin önünde yer alan ve iris ile pupillayı kaplayarak içeriye ışık ileten saydam kısım.

Kornea opaklığı: Test materyali tatbik edildikten sonra korneada ölçülen opaklık düzeyi. Artan kornea opaklığı korneanın hasar gördüğünü gösterir. Opaklık Draize tavşan gözü testinde olduğu gibi öznel olarak veya opaklık ölçer gibi bir cihazla nesnel olarak değerlendirilebilir.

Kornea geçirgenliği: Kornea hücre tabakalarının tamamından geçen sodyum floresin boyası miktarı üzerinden belirlenen kornea epiteli üzerindeki ölçülen hasar miktarı.

EPA Kategorisi 1: 21 günden daha fazla süren aşındırıcı (göz dokusunda kalıcı hasar) veya kornea etki ya da tahriş olması (1).

ABKategorisi R41: Test materyalinin gözün dış yüzeyine tatbikinden sonra ortaya çıkan ve uygulamadan sonra 21 gün içinde tam olarak düzelmeyen doku hasarı veya ciddi görme bozukluğu (2).

Yanlış negatif oran: Test yöntemi tarafından yanlış olarak negatif teşhis edilen bütün pozitif maddelerin oranı. Test yöntemi performansının göstergelerinden birisidir.

Yanlış pozitif oran:Test yöntemi tarafından yanlış olarak pozitif teşhis edilen bütün negatif maddelerin oranı. Test yöntemi performansının göstergelerinden birisidir.

GHS (Kimyasalların Sınıflandırılması ve Etiketlenmesinde Küresel Uyumlaştırma Sistemi): Kimyasalları (maddeler ve karışımlar) standart tip ve fiziksel, sağlık ve çevresel zararlılık düzeylerine göre sınıflandıran, zararlılık işaretleri, uyarı kelimeleri, zararlılık ifadeleri, önlem ifadeleri ve güvenlik bilgi formlarıgibi iletişim araçlarla insanlar (çalışanlar, taşımacılar, tüketiciler, acil yardım personeli gibi) ve çevre üzerinde olumsuz etkileri hakkında bilgininiletimini sağlayan sistem(3).

GHS Kategorisi1: Test materyalinin gözün dış yüzeyine tatbikinden sonra ortaya çıkan ve uygulamadan sonra 21 gün içinde tam olarak düzelmeyen doku hasarı veya ciddi görme bozukluğu (3).

Zarar: Bir maddenin veya bu maddeye maruz kalma durumunun maruz kalan sistem veya (alt) popülasyon üzerinde olumsuz etkide bulunma potansiyeli.

InvitroTahriş Edicilik Puanı (IVIS): BCOP deneyinde her uygulama grubunun ortalama opaklık ve ortalama geçirgenlik değerlerinin her grup için tek bir in vitropuan olarak birleştirildiği ampirik formül. IVIS = ortalama opaklık değeri + (15 *ortalama geçirgenlik değeri).

Negatif kontrol: Test sisteminin bütün bileşenlerini içeren işlemsiz tekrar. Bu numune test materyali tatbik edilmiş numunelerle ve diğer kontrol numuneleri ile işlenerek çözücünün test sistemiyle etkileşim içinde olup olmadığı saptanır.

Tahriş edici olmayan madde: EPA Kategorisi I, II veya III; AB Kategorisi R41 ve R36; veya GHS Kategorisi 1, 2A, veya 2B oküler tahriş ediciler kapsamında olmayan maddeler.

Oküler aşındırıcı: (a) Göz dokusunda kalıcı hasara yol açan maddeler, (b) GHS Kategorisi 1, EPA Kategorisi I veya AB Kategorisi R41 oküler tahriş ediciler kapsamında yer alan maddeler (1) (2) (3).

Oküler tahriş edici: (a) Gözün dış yüzeyine tatbik edilmesinin ardından göz üzerinde giderilebilir değişime yol açan maddeler, (b) EPA Kategorisi II veya III, AB Kategorisi R36 ya da GHS Kategorisi 2A veya 2B oküler tahriş ediciler kapsamında yer alan maddeler (1) (2) (3).

Oküler ciddi tahriş edici: (a) Gözün dış yüzeyine tatbik edilmesinin ardından 21 gün içinde düzelmeyen doku hasarına yada ciddi görme kaybına yol açan maddeler, (b) GHS Kategorisi 1, EPA Kategorisi I ya da AB Kategorisi R41 oküler tahriş ediciler kapsamında yer alan maddeler (1) (2) (3).

Opaklık ölçücü: 'Korneaopaklığını" korneadan geçen ışığı değerlendirerek ölçen cihaz. Tipik cihazın iki kısmı bulunmakta olup her biri kendi ışık kaynağına ve fotoseline sahiptir. Kısımlardan biri işlemden geçirilmiş kornea için kullanılırken diğeri cihazın kalibrasyonu ve sıfırlaması için kullanılır. Halojen lamba ışığı kontrol kısmından (pencere ve sıvı bulunmayan boş odacık) fotosele gönderilir ve korneanın bulunduğu odacığı içeren deney kısmından fotosele gönderilen ışıkla karşılaştırılır. Fotosellerden ışık iletimindeki fark karşılaştırılır ve sayısal opaklık değeri dijital ekranda gösterilir.

Pozitif kontrol: Test sisteminin bütün bileşenlerini içeren ve pozitif tepki doğuracağı bilinen bir maddeyle işlem yapılan tekrar. Pozitif kontrol tepkisindeki değişkenliğin süreç boyunca değerlendirilebilmesi için ciddi tepkinin boyutu çok ileri düzeyde olmamalıdır.

Güvenilirlik: Farklı zamanlarda aynı laboratuvarda ve farklı laboratuvarlarda aynı protokol kullanıldığında test yöntemindeki ölçümlerin yeniden üretilebilirlik düzeyi. Laboratuvar içinde ve laboratuvarlar arasında yeniden üretilebilirlik ile laboratuvar içinde tekrar edilebilirlik hesaplanarak değerlendirilir.

Çözücü/taşıyıcı kontrolü: Test sistemindeki test maddesi tatbik edilmiş çözücü veya taşıyıcı dahil bütün bileşenleri ve diğer kontrol numunelerini içeren aynı çözücü veya taşıyıcıda çözünen test maddesi tatbik edilmiş numuneler için taban tepki tespit etmeyi amaçlayan işlenmemiş numune. Bu numune eşzamanlı negatif kontrolle test edildiği zaman ayrıca çözücü veya taşıyıcının test sistemiyle etkileşime girip girmediğini de gösterir.

Aşamalı test: Test materyali hakkındaki mevcut bütün bilgilerin belirlenen sırayla gözden geçirildiği aşamalı bir test stratejisidir. Her bir sırada, sonraki sıraya geçmeden önce kanıt ağırlığı yaklaşımıyla tehlike sınıflandırması sonucuna ulaşılabilecek yeterli bilgi bulunup bulunmadığı kararlaştırılır. Test materyalinin tahriş edicilik potansiyeli mevcut bilgilere göre belirlenebiliyorsa ek testlere gerek duyulmaz. Test materyalinin tahriş edicilik potansiyeli mevcut bilgilere göre belirlenemiyorsa kesin sınıflandırma olanaklı hale gelinceye kadar ardışık hayvan testleri yapılır.

Doğrulanmış test yöntemi: Belirli bir amaca ilişkin bağıntılılık (doğrulukla birlikte) ve güvenilirlik değerlendirmesi için doğrulama çalışmalarının tamamlanmış olduğu test yöntemi. Doğrulanmış test yönteminin belirli amaç yönünden doğruluk ve güvenilirlik değerlendirmesinde yeterli performans gösteremeyebileceğini belirtmek gerekir.

Kanıt ağırlığı: Maddenin zarar potansiyeline ilişkin sonuca ulaşmak ve bu sonucu desteklemek için çeşitli verilerin yeterli ve yetersiz yönlerinin değerlendirilmesi süreci.

Ek-II
BCOP testin yeterliliği için referans maddeler
Bu test yöntemine ilişkin rutin kullanım öncesinde laboratuvarlar Tablo 1’de önerilen oküler aşındırıcılık sınıflandırmasını doğru yapabilmek konusunda teknik yeterliliklerini ortaya koyabilirler. Sözkonusu maddeler lokal göz tahriş olma/korozyonuna dair in vivotavşan gözü testinden elde edilen tepkiler aralığını yansıtacak şekilde belirlenmiştir (TG 405) (örneğin 1, 2A, 2B veya BM GHS’ye göre sınıflandırılmamış ve etiketlenmemiş (3) (7)). Ancak, bu deneylerin doğrulanmış yararları gözönünde bulundurulduğunda (yalnızca oküler aşındırıcıların/ciddi tahriş edicilerin teşhisi yönünden), sınıflandırma yönünden (aşındırıcı/ciddi tahriş edici veya aşındırıcı/ciddi tahriş edici olmayan maddeler) yeterliği gösterebilecek sadece iki test sonucu mevcuttur. Diğer seçme kriterleri maddelerin ticari yolla edinilebilir olması, yüksek kalitede in vivoreferans verilerin mevcut olması ve Test Talimatnamesinin oluşturulduğu iki in vitroyönteme ilişkin yüksek kaliteli veriler bulunmasıdır. Bu nedenle yeterlik maddelerinin ICCVAM tarafından in vitrooküler toksisite testi yöntemlerinin doğrulanması için önerilen 122 referans madde listesinden seçilmesi gerekmektedir (bkz. Ek H: ICCVAM Önerilen Referans Maddeler Listesi) (5). Referans veriler BCOP ve İzole Tavuk Gözü (ICE) test yöntemleri için ICCVAM Arka Plan Gözden Geçirme Belgelerinde mevcuttur (17) (18).

Tablo 1.BCOP deneylerinde teknik yeterlik için önerilen maddeler

Madde	CASRN	Kimyasal sınıfı (^1)	Fiziksel Hali	In Vivo Sınıflandırması (^2)	In Vitro Sınıflandırması (^3)
Benzalkonyumklorid (% 5)	8001-54-5	Onyum bileşiği	Sıvı	Kategori 1	Aşındırıcı/Ciddi tahriş edici
Klorheksidin	55-56-1	Amin, Amidin	Katı	Kategori 1	Aşındırıcı/Ciddi tahriş edici
Dibenzoil-L-tartarik asit	2743-38-6	Karboksilik asit, Ester	Katı	Kategori 1	Aşındırıcı/Ciddi tahriş edici
İmidazol	288-32-4	Heterosiklik	Katı	Kategori 1	Aşındırıcı/Ciddi tahriş edici
Trikloroasetik asit (% 30)	76-03-9	Karboksilik Asit	Sıvı	Kategori 1	Aşındırıcı/Ciddi tahriş edici
2,6-Diklorobenz-oil klorür	4659-45-4	Asil halid	Sıvı	Kategori 2A	Aşındırıcı/ciddi tahriş edici değil
Etil-2-metilaseto-asetat	609-14-3	Keton, Ester	Sıvı	Kategori 2B	Aşındırıcı/ciddi tahriş edici değil
Amonyum nitrat	6484-52-2	İnorganik tuz	Katı	Kategori 2A	Aşındırıcı/ciddi tahriş edici değil
Gliserol	56-81-5	Alkol	Sıvı	Etiketlenmemiş	Aşındırıcı/ciddi tahriş edici değil
n-Hekzan	110-54-3	Hidrokarbon (asiklik)	Sıvı	Etiketlenmemiş	Aşındırıcı/ciddi tahriş edici değil

Kısaltmalar: CASRN ~ ChemicalAbstracts Service Kayıt Numarası

(^r) Test materyallerine ilişkin kimyasal sınıflar National Library of MedicineMedicalSubjectHeadings (MeSH) sınıflama sistemine (http://www.nlm.nih.gov/mesh) göre oluşturulmuş standart sınıflandırma şeması uyarınca belirlenmiştir.

(2)Invivotavşan gözü testi (OECD TG 405) sonuçlarına göre ve BM GHS (3)(7) kullanılarak oluşturulmuştur.

(3)BCOP ve ICE sonuçlarına göre oluşturulmuştur.